Ошибки при определении группы крови цоликлонами

Галерея 1

Галерея 2

Библиографическое описание:

Тактаева, Е. В. Группа крови человека и проблемы при ее определении / Е. В. Тактаева. — Текст : непосредственный // Молодой ученый. — 2019. — № 2 (240). — С. 64-66. — URL: https://moluch.ru/archive/240/55598/ (дата обращения: 06.06.2023).

Группа крови — это генетически наследуемые признаки, не меняются в течение жизни в естественных условиях и описание индивидуальных антигенных характеристик эритроцитов, которые определяют с помощью методов идентификации специфических групп углеводов и белков, помещенных в мембраны эритроцитов человека или животного. Группа крови также характеризует системы эритроцитарных антигенов, или агглютиногенов (веществ, которые организм человека рассматривает как чужеродные, потенциально опасные, против которых начинает производить собственные антитела, см. агглютиноген), которые контролируются определенными локусами (конкретный участок в хромосоме), содержащие различное количество аллельных (варианты последовательности нуклеотидов ДНК в локусе) генов, таких, например., как A, B и 0 системе AB0. Наличие у людей разных Группа крови обусловлена ​​генетическими факторами, которые содержатся в длинном плече 9-й хромосомы.

К началу 20-го века никто и не подозревал, что кровь может быть разной. Переворот в этой области знаний сделал австрийский врач Карл Ландштейнер, который обнаружил и исследовал три антигены А, В и С. В 1901 году он поставил необычный эксперимент: он принимал сыворотки крови одних людей и смешивал с эритроцитами других, а именно взяв кровь себе и пяти своих сотрудников, отделив сыворотку от эритроцитов с помощью центрифуги и смешал отдельные образцы эритроцитов с сывороткой крови разных лиц и собственной. Некоторые сыворотки склеивали эритроциты, а некоторые — нет. И в зависимости от наличия или отсутствия этой реакции (агглютинации) были обнаружены группы крови.

В совместной работе с Л. Янским по наличию или отсутствию агглютинации Ландштейнер разделил все образцы крови на три группы: А, В и 0. Два года спустя ученики Ландштейнера, А. Штурли и А. Декастелло, открыли четвертую группу крови — АВ. Общепринятым является буквенно-цифровое обозначение Группы крови: первая — 0 (I), вторая группа — А (II), третья группа — В (iii), четвертая группа — АВ (IV). В среднеевропейской популяции по системе AB0 около 43 % людей имеют первую группу крови, 42 % — вторую, 11 % — третьего и около 4 % — четвертую. Группа крови по системе АВ0 отличают по наличию антигенов (агглютиногенов) на эритроцитах и ​​антител (агглютининов) в сыворотке крови (табл. 1).

Эритроцит может обладать только антигеном А (II группа крови), только антигеном В (III группы крови) или и А, и В одновременно (IV группа крови). Если же на поверхности эритроцитов нет ни одного из этих антигенов, значит, он относится к клеткам I (0) группы крови.

Кровь всегда готова к тому, что у нее могут попасть посторонние эритроциты. Если у человека есть антиген А (II группа крови), то в плазме обязательно присутствуют антитела бета. Как только в организм попадает эритроцит, что несет на себе антиген В, антитела тут же прилепятся чужака, как метка. Это передаст иммунной системе сигнал об опасности. У обладателей антигена В (III группы крови) функцию антитела играют альфа распознают эритроциты с А-антигеном.

Таблица 1

Основные факторы, обусловливающие групповую принадлежность крови по системе АВ0

Антигены системы АВО развиваются на эритроцитах еще до рождения ребенка. Например, антиген А находится на эритроцитах 37 дневного плода. Но полное развитие антиген получает после рождения, через несколько месяцев. У взрослых людей кроме антигенов А, В еще имеется антиген Н. Он предшественник антигенов А, В, но может быть и на поверхности эритроцитов первой группы.

В 1911 г обнаружены две подгруппы антигена А, а именно А1 и А2. Между собой они могут отличаться как качественно, так и количественно. Качественно — это особенности в биохимической структуре сахаров. А количественно — это большее количество детерминант в антигене А1. Поэтому факту определены подгруппы А2 и А2В.

Распознать А2 подгруппу можно по сильной активности взаимодействия анти-Н с А2 клетками чем с А1.

Для клинической практики наибольшее значение имеют две классификации Группа крови человека: система AB0 и резус-система (Rhesus) — вследствие того, что эти системы обладают наибольшей антигенной силой. При каждом переливании крови от человека к человеку обязательно учитывают совместимость именно с этими двумя системами, поскольку в случае переливания человеку другой (несовместимой) группы крови происходит агглютинация (склеивание) и гемолиз (разрушение) эритроцитов, что может привести смерти.

Наследование различных групп крови АВО-системы определяется различным сочетанием трех аллелей одной аллеломорфных группы генов, которые обозначаются как JA, β и I ‘и расположены в девять паре хромосом.

Аллель JA определяет образование антигена А на поверхности эритроцитов и агглютинина β в плазме крови, аллель JB — образование антигена В на эритроцитах и агглютинина α в плазме и, в конце концов, за аллеля J отсутствуют антигены А, В на поверхности эритроцитов и содержатся агглютинины α и β в плазме.

Генетические исследования показали, что в этой системе существуют следующие соотношения между генотипом и его фенотипическим проявлением:

‒ генотипы JAJA и JAJ0 дают одинаковый фенотип А с антигеном А и агглютининов β;

‒ генотипы JBJB и JBJ ° обусловливают одинаковый фенотип В с антигеном В и агглютининов α;

‒ генотип JAJB определяет фенотип АВ с антигенами А и В, но без агглютининов α и β;

‒ генотип J ° J ° вызывает фенотип 0 без антигенов А и В, но с агглютининами α и β.

Гены JA и JB в отношении гена J ° ведут себя доминантно.

Группы крови человека можно определить стандартными эритроцитами, цоликлонами (моноклональные антитела) как на плоскости, так и гелевыми технологиями. При определении могут возникнуть ошибки. Технические (например, неправильная маркировка крови и реагентов, неправильное соотношение, срок годности и т. д.), невысокое качество реактивов. Но самое важное это ошибки, обусловленные индивидуальными особенностями антигенов эритроцитов АВО. Поскольку антигены имеют сложную химическую структуру — гликолипиды, гликопротеины, гликозидные остатки, прикрепленные к олигосахаридным цепочкам. Даже сами олигосахаридные цепочки различны у антигенов А и В. Поэтому важно применять широкий спектр антител для определения антигенов. Количество детерминант на эритроцитах различное. При большом их количестве реакция агглютинации сильнее. Окружающая среда может влиять на модификацию антигенов. Детерминанты ослабевают или утрачиваются у онкологически больных людей, лейкозами. Эти изменения мало изучены. Они играют роль в нарушении синтеза трансфераз, ответственных за формирование антигенных детерминант А и В. Так же изменения имеют место при вирусной и бактериальной природе. При таких случаях возможно приобретение, например, В -подобного антигена. Он образуется вследствие влияния микроорганизмов взамен антигена А на мембране эритроцитов. Микроорганизмы выделяют ацетилазы, которые воздействуют на антиген А и последний становится похожим на антиген В. И что интересно, приобретенный антиген В не агглютинирует собственными анти-В антителами. Часто ошибки происходят при не выявлении антигена А2 в группе крови А или в группе крови А2В. Существуют ошибки, связанные со специфической и неспецифической агглютинацией. Это может связано наличием аутоантител как на эритроцитах, так и в сыворотке аллоантител.

Литература:

1. Лавряшина М. Б., Толочко Т. А., Волков А. Н. Аллоантигены крови человека: Учеб. пособ. — Кемерово, 2006; Практическая трансфузиология / Под ред. Г. И. Козинке. — М., 2005.
2. Википедия — статья «Группа крови».
3. Минеева Н. В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. Санкт-Петербург 2010 г. Издание 2-е.

Обновлено: 05.06.2023

Группа крови ABO — это система, отражающая наличие или отсутствие антигенов на поверхности эритроцитов и антител в плазме крови. Определение группы крови имеет огромное значение при переливании крови и ее компонентов.

Синонимы русские

Группа крови, определение группы крови.

Синонимы английские

ABO Grouping, Blood Typing, Blood Group, Blood Type.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона жирную пищу за 24 часа до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Группа крови АВO — это система, отражающая наличие или отсутствие антигенов на поверхности эритроцитов и антител в плазме крови. ABO (читается как «а-бэ-ноль») является самой распространенной системой групп крови в России.

Эритроциты на своей поверхности несут сигнальные молекулы — антигены — агглютиногены. Двумя основными антигенами, встроенными в молекулу эритроцитов, являются А и В. Группы крови определяются на основании наличия или отсутствия этих антигенов. Кровь людей, у которых на эритроцитах присутствует антиген А, относится к второй группе — A (II), кровь тех, у кого на эритроцитах — антиген В, относится к третьей группе — B (III). Если на эритроцитах присутствуют и антигены А, и антигены В — это четвертая группа — AB (IV). Бывает и так, что в крови на эритроцитах не определяется ни одного из этих антигенов — тогда это первая группа — O (I).

В норме организм вырабатывает антитела против тех антигенов (А или В), которых нет на эритроцитах — это агглютинины находящиеся в плазме крови. То есть у лиц со второй группой крови — А(II) — на эритроцитах присутствуют антигены A, а в плазме будут содержаться антитела к антигенам В — обозначаются как анти-B (бета-агглютинин). Так как одноименные антигены (агглютиногены) на поверхности эритроцитов и агглютинины в плазме (A и альфа, B и бета) вступают друг с другом в реакцию и приводят к «склеиванию» эритроцитов, они не могут содержаться в крови у одного человека.

Открытие групповой системы ABO позволило понять, почему переливание крови иногда происходило удачно, а иногда вызывало тяжелые осложнения. Было сформулировано понятие совместимости групп крови. Например, если человеку со второй группой крови — А(II), которая содержит антитела к антигену В, перелить третью группу крови — B (III), произойдет реакция между антигенами и антителами, которая приведет к склеиванию и разрушению эритроцитов и может иметь тяжелые последствия вплоть до летального исхода. Поэтому группы крови при переливании обязательно должны быть совместимы.

Группа крови определяется по наличию или отсутствию склеивания эритроцитов с использованием сывороток, содержащих стандартные антигены и антитела.

В центрах переливания крови на пакетах с кровью или с ее компонентами, полученными от доноров, помечается «O (I)», «A (II)», «B (III)» или «AB (IV)», что позволяет быстро найти кровь нужной группы, когда она требуется.

Для чего используется исследование?

Чтобы узнать, какую кровь можно безопасно переливать пациенту. Крайне важно убедиться, что донорская кровь совместима с кровью реципиента — человека, которому ее собираются переливать. Если в донорской крови или ее компонентах есть антитела к антигенам, содержащимся на эритроцитах реципиента, то может развиться тяжелая трансфузионная реакция, вызванная разрушением эритроцитов в сосудистом русле.

Когда назначается исследование?

• Перед переливанием крови — как тем, кому оно требуется, так и донорам.

Переливание крови и ее компонентов чаще всего требуется в следующих ситуациях:

• • тяжелая анемия,
  • кровотечение, возникшее во время или после операции,
  • тяжелые травмы,
  • массивная кровопотеря любого происхождения,
  • онкологические заболевания и побочные эффекты химиотерапии,
  • нарушения свертываемости крови, в частности гемофилия.

  Что означают результаты?

  Результаты показывают принадлежность крови человека к одной из четырех групп, в зависимости от наличия антигенов на эритроцитах и антител, присутствующих в крови.

  Научные статьи

  Учение о группах крови легло в основу научной и практической раз­работки метода переливания крови, позволив объяснить явления совмести­мости или несовместимости крови донора и реципиента. Групповая система АВО явилась первой открытой изосерологической системой крови человека, кроме которой есть много групповых систем, имеющих значение в клини­ческой практике. Под групповыми (изосерологическими) системами крови человека подразумевается определенные сочетания отдельных антигенных свойств эритроцитов (групповых факторов) и антител по отношению к ним, находящимся в плазме крови. Наличие антигенов и их сочетаний являются постоянной характеристикой крови человека, в то время как наличие анти­тел в норме, характерно только для некоторых систем, главным образом для групповой системы АВО.

  Правильность определения групповой принадлежности крови донора и реципиента имеет большое значение в предотвращении посттрансфузион-ного осложнения гемолитического типа. Ошибки в типировании антигенов эритроцитов системы АВО могут быть обусловлены как техническими по­грешностями, так и индивидуальными особенностями исследуемой крови и недостаточно высоким качеством применяемых реактивов. Во избежания ошибок считается обязательное определение группы крови как донора, так и реципиента в лабораториях проводить перекрестным способом с исполь­зованием стандартных эритроцитов 0(I), А(II), B(III) и стандартных изоге-магглютинирующих сывороток или цоликлонов, с учетом специфических агглютинации (реакции склеивания эритроцитов).

  При исследовании групповой принадлежности крови по системе АВО у доноров и больных могут наблюдаться отклонения от обычной картины агглютинации. Это выражается в отсутствии специфической или наличии неспецифической агглютинации, а также несовпадения результатов иссле­дования по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам. Чаще всего затруднения связаны с присутствием в исследуемой крови аутоантител или аллоантител в сыворотке и искажают результаты АВО — типирования. Дополнительное исследование сывороток с произвольно взятыми образцами эритроцитов может показать какими антителами обусловлена агглютинация — специфическими или неспецифическими. Неспецифиче­ская холодовая агглютинация проявляется в том, что антитела агглютинируют любые образцы эритроцитов, независимо от типа антигенов. По законам изоагглютиннации сыворотка никогда не содержит изоагглютининов, спо­собных реагировать с эритроцитами той же самой крови. Однако клиниче­ские и экспериментальные наблюдения показывают, что аутоагглютинация иногда встречается, как патологическое явление при некоторых заболева­ниях человека: при сердечно — сосудистых заболеваниях, онкологических, гематологических, заболеваниях печени, туберкулезе, сифилисе, малярии, ожоговой болезни и т. д.

  Неспецифические холодовые антитела мало опасны для донора и больного. Однако они могут блокировать т. е. маскировать одновременно присутствующие в сыворотке крови специфические антитела, имеющие значение при подборе крови для трансфузии.

  В практической деятельности группы апробации крови областной станции переливания крови отмечается тенденция роста выявления неспе­цифических гемагглютинаций (НГА) при типировании доноров по системе АВО. За последние годы, в диапазоне от 35000 до 40000 исследований в год, выявлены следующие цифры неспецифических гемагглютинаций: 1996 год 334, 1997 год — 558,1998 год — 810,1999 год — 1742, 2000 год — 1291,2001 год 1407, 2002 год — 1116, 2003 год — 1090, 2004 год — 1246, 2005 год — 1335, 2006 год — 1494.

  Имеют место факты повторяющихся НГА у доноров, впоследствии у которых обнаруживается инфекционное заболевание. НГА совпадают с пе­рестановкой крови доноров на маркеры гепатитов, сифилиса, ВИЧ-инфек­ции. Так в 2005 году 49 совпадений перестановки результатов исследований

  — подтверждено 18 инфекционных заболеваний, в 2006 году из 32 совпаде­ний — подтверждено 5 инфекционных заболеваний. Это свидетельствует о том, что доноры (практически — здоровые люди) попадают на кроводачу в серонегативном периоде инфекционного заболевания или уже болея, но еще не зная об этом. В беседах с донорами выясняются и другие факторы влия­ющие на появление у них НГА: экологическая обстановка региона, социаль­ные условия труда и быта и патологические состояния организма.

  Правильность типирования доноров и реципиентов по системе АВО имеет большое значение в профилактике посттрансфузионных осложнений гемолитического и негемолитического типа, на станции переливания крови проводятся дополнительные исследования антигенов эритроцитов и сыво­роточных белков крови человека. Так как при наличии неспецифических гемагглютининов, плазма в лечебную сеть не выдается, а направляется на фракционирование с целью получения белковых препаратов.

  Проводимая работа выполняется для улучшения качества выпускае­мой продукции.

  Группа крови человека и проблемы при ее определении

  

  Группа крови — это генетически наследуемые признаки, не меняются в течение жизни в естественных условиях и описание индивидуальных антигенных характеристик эритроцитов, которые определяют с помощью методов идентификации специфических групп углеводов и белков, помещенных в мембраны эритроцитов человека или животного. Группа крови также характеризует системы эритроцитарных антигенов, или агглютиногенов (веществ, которые организм человека рассматривает как чужеродные, потенциально опасные, против которых начинает производить собственные антитела, см. агглютиноген), которые контролируются определенными локусами (конкретный участок в хромосоме), содержащие различное количество аллельных (варианты последовательности нуклеотидов ДНК в локусе) генов, таких, например., как A, B и 0 системе AB0. Наличие у людей разных Группа крови обусловлена ​​генетическими факторами, которые содержатся в длинном плече 9-й хромосомы.

  К началу 20-го века никто и не подозревал, что кровь может быть разной. Переворот в этой области знаний сделал австрийский врач Карл Ландштейнер, который обнаружил и исследовал три антигены А, В и С. В 1901 году он поставил необычный эксперимент: он принимал сыворотки крови одних людей и смешивал с эритроцитами других, а именно взяв кровь себе и пяти своих сотрудников, отделив сыворотку от эритроцитов с помощью центрифуги и смешал отдельные образцы эритроцитов с сывороткой крови разных лиц и собственной. Некоторые сыворотки склеивали эритроциты, а некоторые — нет. И в зависимости от наличия или отсутствия этой реакции (агглютинации) были обнаружены группы крови.

  В совместной работе с Л. Янским по наличию или отсутствию агглютинации Ландштейнер разделил все образцы крови на три группы: А, В и 0. Два года спустя ученики Ландштейнера, А. Штурли и А. Декастелло, открыли четвертую группу крови — АВ. Общепринятым является буквенно-цифровое обозначение Группы крови: первая — 0 (I), вторая группа — А (II), третья группа — В (iii), четвертая группа — АВ (IV). В среднеевропейской популяции по системе AB0 около 43 % людей имеют первую группу крови, 42 % — вторую, 11 % — третьего и около 4 % — четвертую. Группа крови по системе АВ0 отличают по наличию антигенов (агглютиногенов) на эритроцитах и ​​антител (агглютининов) в сыворотке крови (табл. 1).

  Эритроцит может обладать только антигеном А (II группа крови), только антигеном В (III группы крови) или и А, и В одновременно (IV группа крови). Если же на поверхности эритроцитов нет ни одного из этих антигенов, значит, он относится к клеткам I (0) группы крови.

  Кровь всегда готова к тому, что у нее могут попасть посторонние эритроциты. Если у человека есть антиген А (II группа крови), то в плазме обязательно присутствуют антитела бета. Как только в организм попадает эритроцит, что несет на себе антиген В, антитела тут же прилепятся чужака, как метка. Это передаст иммунной системе сигнал об опасности. У обладателей антигена В (III группы крови) функцию антитела играют альфа распознают эритроциты с А-антигеном.

  Основные факторы, обусловливающие групповую принадлежность крови по системе АВ0

  Ошибки при определении групп крови

  

  

  

  

  Контроль и редактирование материала проведены кандидатом биологических наук, генеральным директором ООО «Сангвитест» Чмелевым В.М.

  Технические причины

  1. Некорректное расположение реагентов на планшете.
  2. Нарушение количественного отношения цоликлонов и эритроцитов.
  3. Недостаточная стерильность планшетов и пипеток.
  4. Неверная запись в историю болезни.
  5. Несоблюдение времени реакции агглютинации. В случае ожидания менее 5 минут реакция может не наступить при наличии слабых агглютиногенов. При передержанной реакции подсыхание капель с краев может симулировать ложноположительный результат.
  6. Температура воздуха свыше 25 °C. Рекомендуется использовать специальные реагенты с поправкой на температурные условия, опускать внешнюю часть планшета в холодную воду.
  7. Недостаточное или избыточное центрифугирование. В первом случае возможны ложноположительные результаты, во втором — ложноотрицательные.

  Низкое качество реагентов

  1. Титр цоликлонов менее 1:32, использование просроченных реагентов вызывают позднюю или слабо выраженную реакцию.
  2. Загрязнение и недостаточная консервация цоликлонов и стандартных эритроцитов вызывает «бактериальную» агглютинацию.

  

  планшет с внесенными образцами

  

  визуальная оценка при исследовании проб на наличие клинически значимых антигенов эритроцитов

  Биологические особенности эритроцитов

  1. Слабые формы антигенов эритроцитов вызывают позднюю и слабо выраженную агглютинацию. Во избежание ошибок определения групп крови осуществляют повторное исследование с другой серией цоликлонов и увеличенным временем реакции, применяют моноклональные антитела Анти-A_сл., проводят типирование перекрестным способом со стандартными эритроцитами.
  2. «Панагглютинация» вызывает неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками. Онкологические и гематологические пациенты попадают в группу риска. Для устранения «аутоагглютинации» используют трехкратное отмывание эритроцитов. Планшет прогревают в течение 5 минут в термостате при 37 °C. В ряде случаев предварительно подогревают пробирку, реактивы, раствор NaCl.
  3. «Монетные столбики» эритроцитов. По окончании исследования в поле реакции рекомендуется добавить 1 — 2 капли 0,9 % раствора NaCl и покачать планшет.
  4. Неполная агглютинация. Частичная агглютинация эритроцитов может возникать после пересадки пациенту костного мозга или в первые месяцы после трансфузии крови 0(I). Для окончательного типирования антигенов по системам AB0 и Резус рекомендуется использование ID-гелевых карт.

  

  производство типирующих реагентов

  

  стандартные эритроциты ID-DiaCell 0-А-В

  Перекрестный метод определения группы крови

  Стандартные эритроциты являются 5 — 10 % взвесью свежих эритроцитов. Условия хранения — в изотоническом солевом растворе консерванта при + 4 °C. Допускается использование смеси эритроцитов от 2 — 3 лиц одной группы. При использовании перекрестного метода определения группы крови требуется хорошее освещение и температура воздуха в помещении 15 — 25 °C.

  Порядок действий

  1. Отобрать 3 — 5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизатора.
  2. Отстоять сыворотку 1,5 — 2 часа.
  3. Однократно отмыть стандартные эритроциты в 0,9 % растворе NaCl.
  4. Промаркировать лунки планшета: 0(I), A(II), B(III).
  5. Разместить по две капли (приблизительно 0,1 мл) сыворотки в лунки.
  6. Добавить в лунки по 0,03 мл стандартных эритроцитов групп 0, A, B.
  7. Чистыми палочками перемешать сыворотку и эритроциты.
  8. Покачивать планшет на протяжении 5 минут.
  9. Проверить наличие агглютинации в каждой лунке.

  

  

  отбор фенотипированных эритроцитов

  

  внесение стандартных эритроцитов в лунку

  

  Результаты исследования

  Групповая принадлежность	Стандартные эритроциты
  0(I)	A(II)	B(III)
  0(I)	—	+	+
  A(II)	—	—	+
  B(III)	—	+	—
  AB(IV)	—	—	—

  «+» — наличие, «-» — отсутствие агглютинации.

  1. Агглютинация со стандартными эритроцитами A(II) и B(III) свидетельствует о наличии в сыворотке агглютининов α и β. Исследуемая кровь — 0(I).
  2. Реакция в лунке с эритроцитами B(III) говорит о наличии агглютинина β. Группа A(II).
  3. Агглютинация с эритроцитами A(II) — свидетельство наличия агглютинина α. Результат исследования крови — B(III).
  4. Отрицательный результат во всех трех лунках указывает на отсутствие обоих агглютининов. Кровь — AB(IV).

  

  перемешивание образцов крови и реагента в лунках

  

  покачивание планшета

  

  проверка наличия агглютинации

  Определение групп крови AB0 перекрестным способом в обязательном порядке дополняет обнаружение антигенов A и B в реакции прямой агглютинации с использованием цоликлонов.

  Читайте также:

    

  • Цитология (гистология) биопсии среднего, внутреннего уха при воспалении и опухоли

    

  • Эмбриональный рак яичника

    

  • Холецистит острый: причины, симптомы и лечение

    

  • Шейные проприорецепторы. Равновесие и зрительная информация

    

  • Типы мономорфных аденом. Базально-клеточные аденомы слюнной железы.

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела. Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Для чего проводится анализ?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Что такое цоликлоны?

Цоликлон — это солевой раствор моноклональных антигенам к антител эритроцитов человека. Моноклональные антитела для употребляют определения группы крови. Для их используют получения гибридомную технологию. Цоликлоны анти-А и созданы-В анти для определения групп крови системы человека АВО взамен стандартных изогем-сывороток агглютинирующих.

Цоликлоны анти-А и анти-В являются гибридомных продуктом клеточных линий, приобретенных в итоге мышиных слияния антителообразующих В-лимфоцитов с клеточками мышиной опухоль (миеломы костного мозга). Личные гибридомные продуцируют полосы гомогенные антитела только 1-го класса которые, иммуноглобулинов целиком схожи по структуре и био Антитела. активности, продуцируемые клеточками 1-го клона (потомство клеточки одной), являются моноклональными.

В антителах клеток одной специфики, происходящих из 1-го образует, лимфоцита клеточки 1-го клона. Главное заключается в нужно: последующем получить от одной клеточки специальные наработать и антитела их в огромном количестве. Трудность заключается в задач 2-ух преодолении: во-1-х, обычные клеточки после нескольких гибнут делений; во-2-х, только раковые клеточки способны плодиться неограниченно. Для решения этих 2-ух несопоставимых 1975 в заморочек году Г. Кёлер и К. Мильштейн сделали модификации клеточные, либо гибридомы. Гибридомы — это обычных слияние лимфоцитов в питательной среде с клеточками Лимфоциты. миеломы в этой среде не гибнут, а от миеломного получают напарника возможность нескончаемо плодиться. Подобным гибридомный, образом клан плодится, а в итоге этого образуются процесса моноклональные антитела.

Как проводится исследование?

Для определения группы крови с использованием цоликлонов необходима плоская ровная поверхность (планшетка), смоченная водой, набор химических реагентов и пробы биологической жидкости, причем специалист может использовать любую кровь: капиллярную, венозную, замороженную и т. д.

1. Стороны планшета помечают, чтобы не перепутать, на какую из них будет нанесен тот или иной тип цоликлонов.

   

2. На поверхность капают по одной капле реагентов (обычно цилоклоны анти-А и анти-В) и крови, причем объем химических веществ должен в 8-10 раз превышать объем биоматериала.
3. Подождать 3-5 минут, аккуратно покачивая планшет, чтобы жидкости хорошо смешались, а эритроциты не оседали по краям образцов.

Спустя несколько минут наступит реакция, по которой можно с высокой точностью определить принадлежность крови к определенной группе.

Расшифровка результатов

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Обычно, определение группы проводится с помощью стандартных сывороток, хотя, конкуренцию ему составляет еще один метод, сходный по методике проведения с эталонным использование цоликлонов.

Цоликлон моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Таблица. Реакции разных групп крови с цоликлоном анти-А и анти-В.

Что следует учитывать при проведении анализа?

Чтобы результат анализа был максимально достоверным, при проведении процедуры необходимо соблюдать ряд условий:

• реагенты должны храниться в холодном месте при температуре +2-8 градусов во флаконах с плотно закрученной крышкой (в случае нарушения правил хранения они быстро теряют свои свойства);
• для проведения анализа нельзя использовать цоликлоны с истекшим сроком хранения (он составляет около 30 дней) или жидкости, которые содержат осадок, хлопья или мусор;
• исследование выполняется в хорошо освещенном помещении при температуре воздуха не ниже +15 и не выше +25 градусов, причем в нем не должно быть грязи, пыли и других факторов, способных исказить результат;

  

• при нанесении биоматериала и реагентов на поверхность планшетки следует точно соблюдать пропорции – если крови будет слишком много, реакцию сложнее отследить, а в противоположном случае (при малом объеме) она будет слишком медленной;
• нельзя допускать, чтобы капли крови, смешанные с разными типами цоликлонов, сливались вместе – если это случилось, исследование проводят заново; по этой же причине для смешивания реагентов с биоматериалом следует использовать разные палочки.

Продолжительность реакции должна составлять не менее 3 минут, а при сомнительном результате время наблюдения за образцами биоматериала следует продлить до 5 минут. Однако по истечении 10 минут может произойти подсыхание биоматериала и естественное выпадение эритроцитов в осадок, поэтому доверять такому исследованию не стоит.

Для чего необходим анализ?

В настоящее время цоликлоны используются преимущественно для определения группы крови и резус-фактора. Исследование может проводиться как планово, по назначению участкового врача-терапевта, так и по экстренным показаниям, когда требуется переливание крови (в ходе операции произошла массивная кровопотеря или пациент был доставлен с обширной травмой и массивным кровотечением). В поликлинике определение группы проводится преимущественно за счет использования сывороток.

Группа крови по цоликлонам определяется чаще всего в стационаре или специализированных лабораториях. К использованию цоликлонов прибегают, обычно, при невозможности использования сывороток. Скорость получения результатов несколько быстрее, чем при исследовании стандартными сыворотками, что делает методику более универсальной. Многие лаборатории стремятся перейти на использование данного метода.

Видео — Определения групп крови с помощью цоликлонов

Свою группу крови, так же, как и резус-фактор, должен знать каждый человек. Это необходимо, в первую очередь, для собственной безопасности. Ведь никто из нас не застрахован и неизвестно что может приключиться с нашей жизнью в будущем. Знание группы крови позволит в необходимый и ответственный момент добиться быстрого переливания, которое может спасти жизнь.

Помните о том, что ни один врач не будет совершать инфузию крови без знания ее группы и резуса. Данная процедура может понадобиться в случае, если произошло ДТП, травма или еще какой – то неприятный случай, сопровождающийся повреждением целостности кожных покровов и, вследствие чего произойдет кровотечение.

Очень важно в такие моменты немедленно начать переливание, так как каждая минута здесь на вес золота. Чем скорее начнется процедура, тем вероятнее, что она пройдет без дальнейших осложнений для здоровья человека. Это касается неотложных случаев, но существуют и такие моменты, когда знание группы необходимо не срочно.

Это такие ситуации как: планирование проведения оперативного вмешательства, если вы хотите стать донором крови для кого – то, при наступлении беременности, для постановки на военный учет, при планировании беременности, для определения отцовства.

Во всех этих случаях, а также если вы хотите удовлетворить собственное любопытство необходимо сдавать кровь на определение ее группы и резуса. Существует несколько методов, с помощью которых можно узнать эту информацию. Это определение группы с помощью сывороток или при помощи использования цоликлонов. Последний метод является наиболее популярным, так как имеет несколько преимуществ, именно его мы и рассмотрим.

Что это за метод?

Прежде всего необходимо разобраться, что же представляет собой метод определения группы крови при помощи цоликлонов. И здесь мы сразу же сталкиваемся с новым словом, которое, скорее всего, ранее не слышали.

Цоликлоны, что это такое? Это специальный раствор антител, который связывается на поверхности эритроцитов с антигенами. Таким образом, происходит биохимическая реакция, в ходе которой врачи могут узнавать всю необходимую информацию по поводу группы крови или резус-фактора пациента.

Преимущество метода с цоликлонами в том, что в отличии от такового с сыворотками, с его помощью можно сразу же узнать и резус-фактор.

Стоит сразу отметить, что существует несколько разновидностей цоликлонов:

• анти – А (представлен красной жидкостью);
• анти – В (синяя жидкость);
• анти – D (прозрачная жидкость).

Читайте также: Для чего необходим анализ крови на гемостаз и так ли это важно?

Первые два цоликлона необходимы для определения группы крови. А вот третий, представленный в этом списке помогает определиться с резус-фактором. Данные разновидности цоликлонов выпускаются в небольших прозрачных флаконах, объем которых составляет 5 или 10 миллилитров.

Хранить его можно на протяжении двух лет в темном, недоступном для детей месте. Приобрести такой флакончик можно практически в любой аптеке, при необходимости можно заказать его на складе.

Помните о том, что при определении группы крови и резус – фактора ни в коем случае нельзя смешивать данные цоликлоны. Брать их необходимо разными пипетками, обычно каждый из них продается с отдельной пипеткой. В случае, если вы смешаете цоликлоны, то группа крови будет определена неправильно и вам нужно будет еще раз повторить процедуру.

Как установить группу с помощью анти-А, анти-В и анти-D?

Для того, чтобы узнать группу крови, необходимо прежде всего подготовить все необходимое для этого. Поэтому вам понадобится:

• специальный планшет с семью небольшими лунками;
• три цоликлона: анти – А, анти – В и анти – D;
• три пипетки;
• изотонический раствор натрий хлора;
• шприц для забора крови;
• спирт;
• вата;
• жгут.

1. Начинать процедуру необходимо с забора крови. Обычно используют кровь, взятую из вены. Но в некоторых случаях применяют кровь из пальца. Набрав небольшое количество крови можно приступать к проведению самой процедуры.
2. Проследите за тем, чтобы температура воздуха в помещении, где будет проводиться процедура была не более 25 С. Начинать необходимо с нанесения по одной небольшой капле цоликлонов в лунки планшета.
3. В первую лунку капнуть цоликлон анти – А, во вторую анти – В и в ту, которая располагается сбоку поместить анти – D. Обратите внимание, что каждый вид цоликлона нужно наносить разными пипетками, чтобы они не имели возможности смешаться. В противном случае результаты нельзя считать достоверными и процедуру необходимо будет делать заново.
4. После этого необходимо добавить по одной капле крови к каждому цоликлону и аккуратно смешать две эти жидкости.
5. После этого нужно аккуратно раскачивать планшет на протяжении 3 минут.
6. Результаты можно будет наблюдать уже после 10 – 15 секунд, но для более достоверного результата необходимо подождать 3 минуты. Предварительные результаты можно определять по истечению этого времени. Однако после этого необходимо в каждую лунку добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия и смешать жидкости.
7. После этого нужно на протяжении 3 – 5 минут раскачивать планшетку и уже затем окончательно определять группу и резус – фактор.

Читайте также: Что такое ложноположительный анализ на ВИЧ? Диагностика и причины результата

При определении группы крови и резус-фактора вы сразу же обратите внимание на то, что под тремя ленками, которыми вы будете пользоваться находится еще три таких же. Они необходимы для повторного определения, если оно может понадобиться.

Существует всего 4 группы крови:

• I (0);
• II (А);
• III (В);
• IV (АВ).

После того, как вы смешаете цоликлоны с каплями крови и подождете около трех минут, вам необходимо будет приступать к определению результата. О том, какая группа крови в данном определенном случае будет свидетельствовать произошедшая реакция агглютинации. Это значит, что в определенной лунке эритроциты стали похожими на зернышки небольших размеров. А при добавлении в них изотонического раствора натрий хлора они не изменили свой начальный вид.

Как определить резус-фактор – алгоритм действий

Для определения резус – фактора необходимо выполнить практически те же действия, что и при определении группы крови.

1. Для этого необходимо добавить в третью лунку, находящуюся на планшете одну большую каплю цоликлона анти – Д и каплю.
2. Сюда сразу же добавить каплю крови, которая будет немного поменьше. Также само покачать планшет на протяжении трех минут и приступать к определению результатов.
3. После этого необходимо добавить в лунку каплю изотонического раствора натрий хлора и раскачивать планшетку на протяжении еще 5 минут.
4. После этого можно приступать к окончательному определению резус – фактора.

Стоит отметить, что существует два вида резус – фактора. Положительный и отрицательный, с помощью цоликлонов вы сможете определить, какой именно у вас.

Расшифровка результатов

В таблице представлены значения анализа для разных групп крови.

Достоверность

Метод определения группы крови и резус — фактора при помощи цоликлонов является достоверным и не имеет ошибок. Поэтому ему вы можете абсолютно полностью доверять. Он определит группу крови и резус безошибочно, поэтому применяется во всех странах.

Ошибки возможны лишь в тех случаях, когда вы неправильно выполнили процедуру. Возможно, что вы нарушили последовательность этапов или добавили слишком большое количество цоликлонов, а возможно, наоборот, маленькое. В любом из таких случаев процедура будет считаться неправильной. Вы это увидите тогда, когда примитесь за определение результатов.

Читайте также: Все об анализе крови на стерильность. Как сдать тест в Инвитро и других лабораториях?

Также результаты могут быть неверными не в случае вашей вины. Это может наблюдаться в тех случаях, когда цоликлоны были куплены просроченными. Также возможно, что в данном случае присутствует слабая способность эритроцитов к агглютинации.

Еще одним фактором, который способствует неверному определению относится слишком высокая температура воздуха в помещении, где проводится данная процедура. Помните о том, что она должна быть не более 25 С тепла.

Где сдать анализ и какова цена?

Сдать анализ и определить группу крови и резус – фактор при помощи цоликлоном можно, как в медицинской лаборатории, так и в стационаре отделения или поликлинике.

• В стационаре вам определят кровь по показаниям, если это необходимо.
• В медицинской лаборатории вы сможете сдать анализ на определение группы крови, а также резус – фактора тогда, когда вы этого захотите.

Существует большое количество разных лабораторий, которые занимаются проведением данного рода процедур. Одной из самых популярных медицинских лабораторий, которая занимается определением группы крови и резус – фактора при помощи цоликлонов является Invitro. Здесь у вас всего за несколько минут выполнят забор крови и проведут анализ.

Взятие крови из вены здесь обойдется вам в 575 рублей. Сюда входит взятие крови из вены – 200 рублей и определение группы – 375 рублей. Срок, в течении которого вам передадут результаты составляет всего сутки. Дополнительное определение резус – фактора обойдется вам в 375 рублей.

Помните о том, что знать свою группу крови должен каждый человек, который заботится о своем здоровье. Процедура определения не займет у вас слишком много времени, а ее проведение не требует много усилий. Для того, чтобы процедура была выполнена правильно, достаточно лишь ознакомиться с информацией, изложенной в данной статье.

Такая процедура потребует выполнения несложных последовательных действий, с применением цоликлонов Анти-A, анти-B, анти-D. Для проведения процедуры врачи – лаборанты рекомендуют применять одну определенную фирму сывороток.

Наиболее популярной, которая их производит, является Медиклон. Это одна из самых крупных компаний в России, которые занимаются производством реагентов. Также они занимаются производством всех необходимых дополнительных приспособлений, которые могут понадобиться при определении группы крови.