МОСКВА, 6 дек — РИА Новости, Татьяна Пичугина. Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество вопросов. Насколько точны ПЦР-тесты и нужны ли они для диагноза? РИА Новости разбирается в ПЦР-диагностике и почему в нее закрадываются ошибки.
Как выявляют вирус в организме
«Тяжело заболел наш сотрудник. Поднялась высокая температура, положили в больницу. Все признаки COVID-19, — рассказывает Алексей Чемерис, доктор биологических наук, профессор, сотрудник Института биохимии и генетики Уфимского ФИЦ РАН. — А ПЦР-анализ, который ему сделали в специальном медицинском центре наши коллеги-профессионалы, как только он почувствовал недомогание, — отрицательный. Видимо, в тот момент у больного было мало вирусных частиц в организме — за пределами чувствительности теста».
Ученые называют такие результаты ложнонегативными — инфекция проявляется внешне, а тест на возбудителя — «чистый». Тут дело и в самом методе, и в его массовом применении.
Когда медсестра берет мазок из ротоглотки и носоглотки, на кончике зонда остается немного влаги, а в ней — клетки эпителия. Зонд опускают в пластиковую пробирку с раствором (эппендорф) и кончик отламывают, чтобы закрыть емкость. В лаборатории ее помещают в центрифугу, проводят ряд манипуляций для выделения из клеток фрагментов вирусного генома. В случае с COVID-19 — это РНК коронавируса SARS-CoV-2.
В образовавшийся раствор добавляют праймеры — искусственные участки генома коронавируса, именно они опознают SARS-CoV-2, и один из них служит затравкой для синтеза цепочки ДНК под действием определенного фермента на основе механизма обратной транскрипции. Фактически получается ДНК-копия участка коронавируса, которую уже можно размножать. Для этого запускают ПЦР — полимеразную цепную реакцию. За несколько десятков циклов она увеличивает число копий ДНК, а специальный флуоресцентный краситель подсвечивает их в пробирке, сигнализируя о вирусе. Если в биоматериале нет вирусных частиц, ампликонов (продуктов ПЦР) не будет вовсе, результат — отрицательный. Если вируса очень мало, итоговое количество ампликонов по завершении ПЦР окажется за пределами чувствительности прибора и результат — ложноотрицательным.
Тонкости метода
В ПЦР-диагностике много нюансов, объясняет Алексей Чемерис. В лаборатории для научных целей выявляют даже единичные копии вирусного генома в образце, при массовом применении чувствительность обычно на порядки ниже.
«Из-за случайных мутаций генома праймеры могут не сработать, если однонуклеотидные замены или даже более значительные изменения генома вируса пришлись как раз на эти участки. Вероятность невысока, но она есть», — отмечает ученый.
Возможны сбои при ручных операциях, которых не так много. Одна из них — извлечение вирусной РНК из образца. Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот стоит довольно дорого, поэтому обычно эту процедуру доверяют лаборанту. Редко, но ложноположительные результаты случаются, в том числе из-за особенностей ПЦР или загрязнения образца.
Чаще всего, однако, проблемы возникают до того, как пробирка попала в лабораторию. Вот что пишут авторы статьи в журнале «Вестник Росздравнадзора»: «В настоящее время имеются неопровержимые доказательства того, что преаналитическая фаза является основным источником ошибок в лабораторных исследованиях, когда они используются для диагностических или исследовательских целей». Они публикуют целый список нарушений, ведущих к ложноотрицательным результатам.
Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».
Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.
«Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».
Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».
Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.
«Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».
О точности диагностики
В России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. «Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше», — подчеркивает Тамара Силкина.
«Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. «ДНК-технология» заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях», — добавляет медик.
Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.
Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.
Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они изучили записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.
«Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра «Лаборатория». — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет».
Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал. Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, «погода в доме» и так далее.
«Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о «ковидной» природе заболевания или летального исхода», — утверждает Айрат Мавзютов.
Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков «нежизнеспособных» вирусных частиц. Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках.
«Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже «мертвым», человек здоров и никому не опасен», — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.
Альтернатива ПЦР-диагностике
В любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.
В обзоре, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.
«С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.
Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.
https://ria.ru/20201206/ptsr-1586583720.html
«Цена ошибки высока». От чего зависит результат ПЦР-тестов на коронавирус
«Цена ошибки высока». От чего зависит результат ПЦР-тестов на коронавирус — РИА Новости, 06.12.2020
«Цена ошибки высока». От чего зависит результат ПЦР-тестов на коронавирус
Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество… РИА Новости, 06.12.2020
2020-12-06T08:00
2020-12-06T08:00
2020-12-06T08:09
наука
здоровье
коронавирус covid-19
коронавирус в россии
биология
днк
геном
коронавирус sars
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e4/07/10/1574444596_0:100:3072:1828_1920x0_80_0_0_742cac6650983368c665cfe1caa14d59.jpg
МОСКВА, 6 дек — РИА Новости, Татьяна Пичугина. Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество вопросов. Насколько точны ПЦР-тесты и нужны ли они для диагноза? РИА Новости разбирается в ПЦР-диагностике и почему в нее закрадываются ошибки. Как выявляют вирус в организме»Тяжело заболел наш сотрудник. Поднялась высокая температура, положили в больницу. Все признаки COVID-19, — рассказывает Алексей Чемерис, доктор биологических наук, профессор, сотрудник Института биохимии и генетики Уфимского ФИЦ РАН. — А ПЦР-анализ, который ему сделали в специальном медицинском центре наши коллеги-профессионалы, как только он почувствовал недомогание, — отрицательный. Видимо, в тот момент у больного было мало вирусных частиц в организме — за пределами чувствительности теста».Ученые называют такие результаты ложнонегативными — инфекция проявляется внешне, а тест на возбудителя — «чистый». Тут дело и в самом методе, и в его массовом применении.Когда медсестра берет мазок из ротоглотки и носоглотки, на кончике зонда остается немного влаги, а в ней — клетки эпителия. Зонд опускают в пластиковую пробирку с раствором (эппендорф) и кончик отламывают, чтобы закрыть емкость. В лаборатории ее помещают в центрифугу, проводят ряд манипуляций для выделения из клеток фрагментов вирусного генома. В случае с COVID-19 — это РНК коронавируса SARS-CoV-2.В образовавшийся раствор добавляют праймеры — искусственные участки генома коронавируса, именно они опознают SARS-CoV-2, и один из них служит затравкой для синтеза цепочки ДНК под действием определенного фермента на основе механизма обратной транскрипции. Фактически получается ДНК-копия участка коронавируса, которую уже можно размножать. Для этого запускают ПЦР — полимеразную цепную реакцию. За несколько десятков циклов она увеличивает число копий ДНК, а специальный флуоресцентный краситель подсвечивает их в пробирке, сигнализируя о вирусе. Если в биоматериале нет вирусных частиц, ампликонов (продуктов ПЦР) не будет вовсе, результат — отрицательный. Если вируса очень мало, итоговое количество ампликонов по завершении ПЦР окажется за пределами чувствительности прибора и результат — ложноотрицательным. Тонкости методаВ ПЦР-диагностике много нюансов, объясняет Алексей Чемерис. В лаборатории для научных целей выявляют даже единичные копии вирусного генома в образце, при массовом применении чувствительность обычно на порядки ниже.»Из-за случайных мутаций генома праймеры могут не сработать, если однонуклеотидные замены или даже более значительные изменения генома вируса пришлись как раз на эти участки. Вероятность невысока, но она есть», — отмечает ученый.Возможны сбои при ручных операциях, которых не так много. Одна из них — извлечение вирусной РНК из образца. Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот стоит довольно дорого, поэтому обычно эту процедуру доверяют лаборанту. Редко, но ложноположительные результаты случаются, в том числе из-за особенностей ПЦР или загрязнения образца.Чаще всего, однако, проблемы возникают до того, как пробирка попала в лабораторию. Вот что пишут авторы статьи в журнале «Вестник Росздравнадзора»: «В настоящее время имеются неопровержимые доказательства того, что преаналитическая фаза является основным источником ошибок в лабораторных исследованиях, когда они используются для диагностических или исследовательских целей». Они публикуют целый список нарушений, ведущих к ложноотрицательным результатам. Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.»Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».О точности диагностикиВ России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. «Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше», — подчеркивает Тамара Силкина.»Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. «ДНК-технология» заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях», — добавляет медик.Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они изучили записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.»Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра «Лаборатория». — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет».Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал. Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, «погода в доме» и так далее.»Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о «ковидной» природе заболевания или летального исхода», — утверждает Айрат Мавзютов.Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков «нежизнеспособных» вирусных частиц. Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках. «Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже «мертвым», человек здоров и никому не опасен», — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.Альтернатива ПЦР-диагностикеВ любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.В обзоре, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.»С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.
https://ria.ru/20200507/1571041644.html
https://ria.ru/20201201/koronavirus-1587118633.html
https://ria.ru/20201124/kovid-1586064272.html
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2020
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e4/07/10/1574444596_333:0:2821:1866_1920x0_80_0_0_a8001e2de8c56b736340a788be0cfca5.jpg
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
здоровье, коронавирус covid-19, коронавирус в россии, биология, днк, геном, коронавирус sars
Наука, Здоровье, Коронавирус COVID-19, Коронавирус в России, биология, ДНК, геном, Коронавирус SARS
МОСКВА, 6 дек — РИА Новости, Татьяна Пичугина. Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество вопросов. Насколько точны ПЦР-тесты и нужны ли они для диагноза? РИА Новости разбирается в ПЦР-диагностике и почему в нее закрадываются ошибки.
Как выявляют вирус в организме
«Тяжело заболел наш сотрудник. Поднялась высокая температура, положили в больницу. Все признаки COVID-19, — рассказывает Алексей Чемерис, доктор биологических наук, профессор, сотрудник Института биохимии и генетики Уфимского ФИЦ РАН. — А ПЦР-анализ, который ему сделали в специальном медицинском центре наши коллеги-профессионалы, как только он почувствовал недомогание, — отрицательный. Видимо, в тот момент у больного было мало вирусных частиц в организме — за пределами чувствительности теста».
Ученые называют такие результаты ложнонегативными — инфекция проявляется внешне, а тест на возбудителя — «чистый». Тут дело и в самом методе, и в его массовом применении.
Когда медсестра берет мазок из ротоглотки и носоглотки, на кончике зонда остается немного влаги, а в ней — клетки эпителия. Зонд опускают в пластиковую пробирку с раствором (эппендорф) и кончик отламывают, чтобы закрыть емкость. В лаборатории ее помещают в центрифугу, проводят ряд манипуляций для выделения из клеток фрагментов вирусного генома. В случае с COVID-19 — это РНК коронавируса SARS-CoV-2.
В образовавшийся раствор добавляют праймеры — искусственные участки генома коронавируса, именно они опознают SARS-CoV-2, и один из них служит затравкой для синтеза цепочки ДНК под действием определенного фермента на основе механизма обратной транскрипции. Фактически получается ДНК-копия участка коронавируса, которую уже можно размножать. Для этого запускают ПЦР — полимеразную цепную реакцию. За несколько десятков циклов она увеличивает число копий ДНК, а специальный флуоресцентный краситель подсвечивает их в пробирке, сигнализируя о вирусе. Если в биоматериале нет вирусных частиц, ампликонов (продуктов ПЦР) не будет вовсе, результат — отрицательный. Если вируса очень мало, итоговое количество ампликонов по завершении ПЦР окажется за пределами чувствительности прибора и результат — ложноотрицательным.
Тонкости метода
В ПЦР-диагностике много нюансов, объясняет Алексей Чемерис. В лаборатории для научных целей выявляют даже единичные копии вирусного генома в образце, при массовом применении чувствительность обычно на порядки ниже.
«Из-за случайных мутаций генома праймеры могут не сработать, если однонуклеотидные замены или даже более значительные изменения генома вируса пришлись как раз на эти участки. Вероятность невысока, но она есть», — отмечает ученый.
Возможны сбои при ручных операциях, которых не так много. Одна из них — извлечение вирусной РНК из образца. Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот стоит довольно дорого, поэтому обычно эту процедуру доверяют лаборанту. Редко, но ложноположительные результаты случаются, в том числе из-за особенностей ПЦР или загрязнения образца.
Чаще всего, однако, проблемы возникают до того, как пробирка попала в лабораторию. Вот что
пишут
авторы статьи в журнале «Вестник Росздравнадзора»: «В настоящее время имеются неопровержимые доказательства того, что преаналитическая фаза является основным источником ошибок в лабораторных исследованиях, когда они используются для диагностических или исследовательских целей». Они публикуют целый список нарушений, ведущих к ложноотрицательным результатам.
«Мы его не контролируем». Ученый — о странном поведении SARS-CoV-2
Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».
Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.
«Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».
О точности диагностики
В России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. «Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше», — подчеркивает Тамара Силкина.
«Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. «ДНК-технология» заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях», — добавляет медик.
Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.
Медицинский работник берет мазок у пациентки в поликлинике № 28 в Волгограде
1 из 6
Для взятия мазков существуют универсальные наборы с длинным зондом. После взятия мазка зонд помещают в пробирку-эппендорф и герметично закрывают. ООО «Лаборатория Гемотест» в Тамбове
2 из 6
Медицинская сестра наклеивает индивидуальный штрихкод на пробирку с ПЦР-тестом на коронавирус COVID-19
3 из 6
Бокс приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР (полимеразной цепной реакции). Микробиологическая лаборатория ФБУЗ » Центр гигиены и эпидемиологии в Краснодарском крае»
4 из 6
Станция для проведения ПЦР-тестов
5 из 6
Вход в ПЦР-бокс лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Архангельской области»
6 из 6
Медицинский работник берет мазок у пациентки в поликлинике № 28 в Волгограде
1 из 6
Для взятия мазков существуют универсальные наборы с длинным зондом. После взятия мазка зонд помещают в пробирку-эппендорф и герметично закрывают. ООО «Лаборатория Гемотест» в Тамбове
2 из 6
Медицинская сестра наклеивает индивидуальный штрихкод на пробирку с ПЦР-тестом на коронавирус COVID-19
3 из 6
Бокс приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР (полимеразной цепной реакции). Микробиологическая лаборатория ФБУЗ » Центр гигиены и эпидемиологии в Краснодарском крае»
4 из 6
Станция для проведения ПЦР-тестов
5 из 6
Вход в ПЦР-бокс лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Архангельской области»
6 из 6
Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.
Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они
изучили
записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.
«Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра «Лаборатория». — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет».
Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал. Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, «погода в доме» и так далее.
«Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о «ковидной» природе заболевания или летального исхода», — утверждает Айрат Мавзютов.
Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков «нежизнеспособных» вирусных частиц. Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках.
«Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже «мертвым», человек здоров и никому не опасен», — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.
Раскрыт механизм проникновения коронавируса в мозг
Альтернатива ПЦР-диагностике
В любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.
В
обзоре
, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.
«С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.
Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.
Назван самый ранний признак COVID-19, который легко пропустить
Определение
Новая коронавирусная инфекция COVID-19 – это острое инфекционное заболевание, относящееся к группе ОРВИ (острых респираторных вирусных инфекций). Его вызывает новый коронавирус SARS-CoV-2.
Основным источником инфекции является больной человек, в том числе находящийся в инкубационном периоде заболевания (между моментом заражения и появлением первых жалоб).
Наибольшую опасность для окружающих человек представляет в последние два дня инкубационного периода (больной еще не знает, что болен, но уже выделяет вирус) и в первые дни болезни (поскольку выделяет максимальное количество вируса).
Пути передачи вируса
Передача инфекции осуществляется воздушно-капельным и контактным путями. Воздушно-капельный путь считается основным и реализуется при кашле, чихании и разговоре на близком (менее 2 метров) расстоянии. Контактным путем можно заразиться через рукопожатия, объятия и поцелуи, а также через поверхности и предметы, пищевые продукты, обсемененные вирусом.
Жалобы при COVID-19 неспецифичны и встречаются при других ОРВИ. В большинстве случаев болезнь протекает нетяжело. Нередко отмечается и вовсе бессимптомное течение: человек чувствует себя хорошо, не предъявляет никаких жалоб, а о перенесенной болезни узнает случайно, сдав анализы.
Классификация COVID-19
По степени тяжести:
- Легкое течение (около 80% заболевших).
- Температура тела до 38°C, кашель (чаще сухой, но может быть и с мокротой), общая слабость, боли в горле; возможно, снижение обоняния и вкуса, расстройство стула, различные кожные высыпания.
- Среднетяжелое течение.
- Температура тела выше 38°C.
- Частота дыхания более 22/мин.
- Одышка – ощущение нехватки воздуха, сопровождающееся изменением частоты, глубины и ритма дыхания при обычных физических нагрузках.
- Изменения на КТ (компьютерной томографии) органов грудной клетки, типичные для вирусного поражения (объем поражения минимальный или средний; КТ 1-2).
- Сатурация кислорода (SpO2) – насыщение крови кислородом менее 95%.
- СРБ (С-реактивный белок) сыворотки крови более 10 мг/л.
- Тяжелое течение.
- Частота дыхания более 30/мин.
- SpO2 менее 93%.
- Снижение уровня сознания или возбуждение.
- Нестабильная гемодинамика (снижение артериального давления менее 90/60 мм рт. ст., уменьшение объема выделяемой мочи).
- Изменения в легких на КТ органов грудной клетки, типичные для вирусного поражения (объем поражения значительный или субтотальный; КТ 3-4).
- Изменения ряда лабораторных показателей, определяемых в условиях отделения интенсивной терапии.
- Крайне тяжелое течение – множественные тяжелейшие поражения органов и систем с необходимостью респираторной поддержки (инвазивной вентиляции легких).
- Изменения в легких при КТ, типичные для вирусного поражения критической степени (объем поражения значительный или субтотальный; КТ 4).
Лабораторная диагностика
Лабораторная диагностика новой коронавирусной болезни COVID-19 подразумевает обнаружение вируса, подтверждение перенесенной инфекции, оценку степени выраженности воспаления, возможных осложнений (присоединения бактериальной инфекции, развития тромбозов).
Наличие вируса в организме можно выявить путем взятия мазков из носоглотки (носа) и ротоглотки (зева).
- Обнаружение РНК SARS-CoV-2 методом ПЦР;
- Обнаружение вирусных антигенов (экспресс-диагностика).
Для оценки иммунного ответа (наличия иммунитета к COVID-19, подтверждения текущей или перенесенной инфекции) определяют антитела классов IgM, IgG к SARS-CoV-2 в крови.
- Обнаружение антител IgG и IgM к коронавирусу – качественный (есть или нет антитела) и количественный (сколько антител) методы.
- Обнаружение антител IgG и IgM к коронавирусу (экспресс-диагностика).
Экспресс-методы выявления антигена в мазке или антител в крови всегда качественные, то есть результат интерпретируется как положительный («обнаружено») или отрицательный («не обнаружено»).
Их достоинства – быстрое (в течение 20-30 минут) получение результата, возможность использования в домашних условиях. Недостаток – не слишком высокая точность: из-за невысокой чувствительности тесты не всегда могут определить пациентов с новой коронавирусной болезнью (не определяют примерно каждого четвертого). Если тест положительный, то это практически всегда верно. Отрицательный тест не исключает наличие болезни. Экспресс-методы могут использоваться в первичной диагностике для определения дальнейшей тактики обследования.
Дополнительные методы лабораторной диагностики
- Клинический (общий) анализ крови, С-реактивный белок, прокальцитонин – для исключения присоединения бактериальной инфекции.
С-реактивный белок (СРБ, CRP)
С-реактивный белок – белок острой фазы, чувствительный индикатор повреждения тканей при воспалении, некрозе, травме.
Синонимы: Анализ крови на СРБ; С-реактивный …
Прокальцитонин (Procalcitonin)
Синонимы: Анализ крови на прокальцитонин; ПКТ. Procalcitonin; PCT.
Краткая характеристика определяемого вещества Прокальцитонин
Прокальцитонин является прогормоном кал…
D-димер (D-dimer)
Синонимы: Фрагмент расщепления фибрина.
D-dimer, Fragment D-dimer, Fibrin degradation fragment.
Краткая характеристика определяемого вещества D-димер
D-димер представляет собой раст…
ПЦР- мазки из носоглотки и ротоглотки для выявления РНК SARS-CoV-2
Коронавирус SARS-CoV-2, определение РНК, качественный анализ, в мазке со слизистой носоглотки и/или ротоглотки — основной метод диагностики текущей инфекции.
Срок выполнения исследования на выявление РНК SARS-CoV-2 в лабораториях медицинских организаций не должен превышать 48 часов с момента получения биологического материала. Если отбор проводится не в лабораторном центре, необходимо учитывать время доставки проб до лаборатории. Срок выполнения исследований в референтной лаборатории – не более 48 часов с момента доставки образца.
Взятие мазка методом ПЦР для обнаружения РНК SARS-CoV-2 проводится:
- всем лицам с признаками ОРВИ;
- пациентам с диагнозом «внебольничная пневмония»;
- лицам, контактировавшим с больным COVID-19, при появлении симптомов, не исключающих COVID-19;
- работникам медицинских организаций, имеющим риск инфицирования при профессиональной деятельности, до появления IgG – 1 раз в неделю; при появлении симптомов, не исключающих COVID-19, – немедленно;
- прибывшим на территорию Российской Федерации из-за границы;
- взрослым и детям из организованных коллективов — интернатов, детских домов, пансионатов для пожилых и т.д. при появлении респираторных симптомов.
Правила подготовки к процедуре забора мазка
Врач должен взять мазок из ротоглотки и носоглотки. Мазки со слизистой оболочки носоглотки и ротоглотки собираются в одну пробирку для большей концентрации вируса (при его наличии).
Пациенту за 3-4 часа до взятия мазка нельзя есть, пить, чистить зубы, полоскать рот и горло, использовать спрей-освежитель для ротовой полости, жевать жевательную резинку, курить. Кроме того, нельзя промывать нос, использовать спреи, капли, мази для носа. Это позволит сохранить для исследования максимально возможное число пораженных вирусом клеток эпителия (наружного слоя) верхних дыхательных путей.
Интерпретация результатов
«Обнаружено» – результат говорит о наличии РНК вируса в пробе биоматериала пациента, то есть человек инфицирован коронавирусом, заразен для окружающих.
В случае получения в лаборатории положительного теста результат выдается как «первично положительный», а биоматериал передается для проведения подтверждающего теста в референсный центр Роспотребнадзора.
Результат первичного тестирования может быть как подтвержден, так и не подтвержден референсным центром. При получении первично-положительного результата пациенту необходимо соблюдать режим самоизоляции до получения результата подтверждающего теста. Формулировка «обнаружено» в результате подтверждающего теста означает, что исследование пробы пациента выполнено дважды, первично положительный результат подтвержден дополнительным исследованием в референсном центре. При получении окончательного результата «обнаружено» заболевшему предписывается соблюдать режим самоизоляции и обратиться к врачу.
«Не обнаружено» – результат говорит об отсутствии РНК вируса в пробе пациента, значит в организме человека нет коронавируса.
К сожалению, ПЦР-диагностика иногда может давать ошибочные результаты. Причины ложноотрицательных результатов (человек болен COVID-19, а результат теста отрицательный):
- количество вируса в образце меньше порога чувствительности тест-системы из-за некорректной подготовки пациента к исследованию или из-за небольшого количества вируса в организме (низкая вирусная нагрузка), например, при бессимптомном течении или в период выздоровления;
- некорректное взятие мазка – например, только из зева или только из носа, погрешности в технике забора материала;
- нарушение рекомендованного срока хранения взятого образца;
- ненадежная система идентификации образцов, что ведет к получению чужого результата.
Исследование на антитела к коронавирусу
Антитела, или иммуноглобулины – специальные белки, которые вырабатывает иммунная система человека в ответ на попадание в организм любого инфекционного агента, в том числе SARS-CoV-2.
Антитела класса М (IgМ) к SARS-CoV-2 появляются, как правило, на 7-10 день болезни. Они могут сохраняться в организме человека до 2-3 месяцев. Поэтому их обнаружение говорит о текущей или недавно перенесенной инфекции.
Антитела класса G (IgG) к SARS-CoV-2 обнаруживают обычно через 10-14 дней после начала болезни. Выявление IgG-антител к возбудителю COVID-19 свидетельствует, что человек выздоравливает или уже переболел коронавирусной инфекцией. Длительность их сохранения в организме на сегодняшний день точно неизвестна.
Тестирование на антитела к вирусу SARS-Cov-2 рекомендуется использовать в следующих случаях:
- в качестве дополнительного метода диагностики острой инфекции (не ранее 7-го дня болезни для IgM, не ранее 10-14-го дня болезни для IgG) или при невозможности по какой-либо причине исследования мазков;
- для выявления лиц с бессимптомной формой инфекции;
- для установления факта перенесенной ранее инфекции при обследовании групп риска и проведении массового обследования населения для оценки уровня популяционного иммунитета;
- для отбора потенциальных доноров иммунокомпетентной (антиковидной) плазмы.
Донорами антиковидной плазмы могут стать лица в возрасте от 18 до 55 лет, с отсутствием противопоказаний к донорству (ряд хронических заболеваний, беременность), которые болели коронавирусной инфекцией и выздоровели, при условии, что с начала болезни прошло не менее 5 недель.
На начало 2021 года в официальных источниках приводятся следующие показатели антител, считающиеся достаточными для донорства: IgG > 40 и IgM ≥ 1,5 или IgG > 80 и IgM ≥ 0. Решение о том, может ли человек стать донором антиковидной плазмы, принимает врач.
Отдельно стоит сказать об оценке степени иммунной защиты (формировании иммунитета) после вакцинации. На сегодняшний день известно, что после перенесенной коронавирусной инфекции в организме могут формироваться антитела (IgG) к нескольким белкам коронавируса. Исследуемые после болезни IgG – это антитела к так называемому N-белку коронавируса (исследуется в большинстве лабораторий).
Для оценки иммунитета после вакцинации имеет значение только выявление определенных IgG – антител к спайковому (S) белку SARS-CoV-2 (качественный).
Этот анализ выявляет наличие или отсутствие антител. При повторном выполнении количественного анализа можно оценивать устойчивость иммунного ответа по динамике уровня этих антител. Тест на антитела к N-белку не информативен для оценки поствакцинального иммунитета.
Объем сроки и кратность исследований при новой коронавирусной болезни COVID-19
Объем, сроки и кратность лабораторных исследований зависят от степени тяжести заболевания. Легкое течение заболевания с наблюдением пациента в амбулаторных условиях, как правило, не требует дополнительных лабораторных исследований. В случае среднетяжелого и тяжелого течения выполняются следующие исследования:
Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоформула, СОЭ.
Биохимический анализ крови (мочевина, креатинин, калий/натрий/хлор, глюкоза, АлАт, АсАт, билирубин общий, альбумин, ферритин).
Мочевина (в крови) (Urea)
Синонимы: Диамид угольной кислоты; Карбамид; Мочевина в крови; Азот мочевины.
Urea nitrogen; Urea; Blood Urea Nitrogen (BUN); Urea; Plasma Urea.
Краткая характеристика аналита Мочевина
Моче�…
Креатинин (в крови) (Creatinine)
Синонимы: Анализ крови на креатинин; Сывороточный креатинин; Креатинин сыворотки, оценка СКФ. Сreat; Сre; Blood Creatinine; Serum Creatinine; Serum Creat.
Краткая характеристика определяе…
Калий, натрий, хлор в сыворотке крови (К+, Potassium, Na+, Sodium, Сl-, Chloride, Serum)
Синонимы: Анализ крови на электролиты; Электролиты в сыворотке крови. Electrolyte Panel; Serum electrolyte test; Sodium, Potassium, Chloride; Na/K/Cl.
Краткая характеристика определяемых �…
Глюкоза (в крови) (Glucose)
Материал для исследования
Сыворотка или плазма крови. Если нет возможности центрифугировать пробу через 30 минут после взятия для отделения сыворотки/плазм…
Билирубин общий (Bilirubin total)
Синонимы: Общий билирубин крови; Общий билирубин сыворотки.
Totalbilirubin; TBIL.
Краткая характеристика определяемого вещества Билирубин общий
Билирубин – это пигмен�…
Альбумин (в крови) (Albumin)
Синонимы: Человеческий сывороточный альбумин; ЧСА; Альбумин плазмы;
Human Serum Albumin; ALB.
Краткая характеристика исследуемого вещества Альбумин
Альбумин – эт…
Ферритин (Ferritin)
Синонимы: Анализ крови на ферритин; Депонированное железо; Индикатор запасов железа. Serum ferritin.
Краткая характеристика определяемого вещества Ферритин
Ферритин –…
Биохимический анализ крови не дает специфической информации о коронавирусной инфекции, но обнаруживаемые отклонения могут указывать на наличие патологии со стороны внутренних органов, декомпенсацию сопутствующих заболеваний и развитие осложнений. Он может иметь прогностическое значение, оказывает влияние на выбор лекарственных средств и режим их дозирования.
Значимое повышение С-реактивного белка (СРБ) может говорить в пользу бактериальной инфекции, коррелирует с тяжестью течения, распространенностью воспаления и прогнозом при пневмонии.
С-реактивный белок (СРБ, CRP)
С-реактивный белок – белок острой фазы, чувствительный индикатор повреждения тканей при воспалении, некрозе, травме.
Синонимы: Анализ крови на СРБ; С-реактивный …
Прокальцитонин при коронавирусной инфекции, в том числе с поражением легких, находится в пределах нормальных значений.
Прокальцитонин (Procalcitonin)
Синонимы: Анализ крови на прокальцитонин; ПКТ. Procalcitonin; PCT.
Краткая характеристика определяемого вещества Прокальцитонин
Прокальцитонин является прогормоном кал…
Повышение прокальцитонина, как и СРБ, свидетельствует о присоединении бактериальной инфекции и коррелирует с тяжестью течения, распространенностью воспаления и прогнозом при бактериальных осложнениях.
Значимое повышение D-димера может свидетельствовать о наличии тромбозов.
D-димер (D-dimer)
Синонимы: Фрагмент расщепления фибрина.
D-dimer, Fragment D-dimer, Fibrin degradation fragment.
Краткая характеристика определяемого вещества D-димер
D-димер представляет собой раст…
КТ органов грудной клетки при COVID- 19
Методы лучевой диагностики (рентгенография и КТ органов грудной клетки без внутривенного контрастирования) применяют для выявления пневмоний, вызванных COVID-19, их осложнений, дифференциальной диагностики с другими заболеваниями легких, а также для определения степени выраженности и динамики изменений, оценки эффективности проводимой терапии.
КТ имеет высокую чувствительность в выявлении изменений в легких, характерных для COVID-19.
Как и любое другое обследование, КТ должно назначаться по строгим показаниям и проводиться после соотнесения пользы и потенциального вреда.
Нельзя забывать, что выполнение КТ сопряжено с лучевой нагрузкой. Кроме того, во время пребывания в отделении существует дополнительный риск инфицирования COVID 19.
Ограничениями КТ в сравнении с рентгенографией являются меньшая доступность технологии в отдельных медицинских организациях, городах и регионах; недоступность исследования для части пациентов, находящихся на ИВЛ.
Несмотря на бОльшую доступность, относительно низкую стоимость рентгенографии по сравнению с КТ, именно при COVID-19 предпочтительнее проведение КТ. Дело в том, что рентгенография в данном случае недостаточно информативна.
Для поражения легких при COVID-19 характерно снижение воздушности легочной ткани — так называемое «матовое стекло». Эти изменения не являются строго специфичными для COVID-19, они встречаются, хотя и реже, и при других вирусных инфекциях. КТ точно оценивает степень тяжести пневмонии при COVID-19, которая определяется количеством пораженной легочной ткани:
КТ-1 – до 25 %,
КТ-2 — до 50 %,
КТ-3 — до 75 %,
КТ-4 – более 75%.
Рекомендовано проведение КТ органов грудной клетки пациентам при среднетяжелом, тяжелом и крайне тяжелом течении острой респираторной инфекции с целью принятия решения о госпитализации, оценки характера изменений и объема поражения легких, а также динамики процесса и определения прогноза заболевания.
КТ может выявлять изменения в легких у значительного числа пациентов с бессимптомной и легкой формами заболевания. Результаты КТ в этих случаях не влияют на тактику лечения и прогноз заболевания при наличии лабораторного подтверждения COVID-19. Поэтому массовое применение КТ для скрининга бессимптомных и легких форм болезни не рекомендуется.
Не рекомендовано применение методов лучевой диагностики при отсутствии симптомов ОРВИ у пациентов с положительными результатами на РНК SARS-CoV-2. Данные лучевого исследования не заменяют результаты обследования на РНК SARS-CoV-2. А отсутствие изменений при КТ не исключают наличия COVID-19 и риска развития пневмонии через некоторое время после проведения исследования.
Источники:
- Временные методические рекомендации. Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19). Версия 8.1 (01.10.2020) Министерство здравоохранения Российской Федерации. Утверждены заместителем министра Здравоохранения Российской Федерации Е. Г. Камкиным. 227 с.
- Доктор Питер Петербургский сайт о здоровье. Специалист лаборатории объяснила, почему ПЦР-тесты на коронавирус могут выдавать ошибку 02.12.2020.
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Для корректной оценки результатов ваших анализов в динамике предпочтительно делать исследования в одной и той же лаборатории, так как в разных лабораториях для выполнения одноименных анализов могут применяться разные методы исследования и единицы измерения.
Информация проверена экспертом
Лишова Екатерина Александровна
Высшее медицинское образование, опыт работы — 19 лет
Поделитесь этой статьей сейчас
Рекомендации
-
20842
14 Ноября
-
4007
02 Сентября
-
91483
03 Марта
Похожие статьи
Миалгия
Миалгия: причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения.
Сухой кашель
Кашель – это естественная, защитная реакция организма на разнообразные раздражители. В некоторых случаях кашель может быть симптомом болезни. Сухим называется кашель, при котором мокрота не выделяется вообще или выделяется в очень небольшом количестве.
Тугоухость
Тугоухость: причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения.
Отек легких
Отек легких: причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения.
Кашель
Кашель: причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения.
Удаление
родинок лазером
Выгода 50%
Быстро!
Безболезненно!
Без реабилитации!
СКИДКА 25%
Диагностика у гинеколога
Все за один день!
Скидка до 25%
Диагностика у уролога
Проверь здоровье за один день
Удобно и Выгодно
Всего один день — живи спокойно год!
Скидка 20%
на прием ЛОР-врача*
Скидка 15%
Удаление аденоидов лазером
Без реабилитации!
Безболезненно!
Лечение недержания мочи
Скидка 20%*
Эффект после первой процедуры!
Не меняете свой ритм жизни!
Супер выгодно!
Возможны ли ошибки в ПЦР-диагностике? Ложноотрицательные и ложноположительные результаты ПЦР
На получение ложных результатов в ПЦР-диагностике — как ложноположительных, так и ложноотрицательных — могут повлиять различные обстоятельства.
Применение метода полимеразной цепной реакции — ПЦР — требует строжайшего соблюдения всех этапов анализа, начиная от забора анализа врачом до интерпретации полученных результатов анализа. Насколько информативен ПЦР-анализ зависит от многих обстоятельств.
- Ложноположительный результат анализа может получиться в результате попадания в материал (мазок или соскоб уретры) крови.
- Подобные же ложноположительные результаты ПЦР-анализа получаются вследствие не попадания в материал эпителиальных клеток, а содержания большого количества совершенно неинформативной слизи.
- На получение ложных результатов ДНК-анализа оказывает влияние неправильная транспортировка и хранение полученных проб. ДНК инфекции в этом случае может разрушаться и как следствие — ложноотрицательный результат.
- Нарушение стерильности при проведении ПЦР-диагностики — еще одна причина ложноположительной ПЦР. В забранный материал пациента могут попасть чужеродные бактерии с рук врача, с одежды, со стекла или загрязненных инструментов, многоразовой посуды. В результате обнаружится «несуществующая» инфекция.
- Непригодность реагентов. Неоснащенная и несовременная лаборатория, где на непригодность реагентов врачи «закрывают глаза» — это еще одна и серьезных причин недостоверной диагностики. Конечно, это сильно удешевляет лабораторную диагностику, но не может не сказаться на ее результатах.
Стремясь избежать подобных ошибок, врачи медицинского центра «Евромедпрестиж» очень серьезно подходят к проведению лабораторной диагностики: используют только одноразовые материалы на всех этапах анализа, соблюдают необходимые меры по поддержанию полной стерильности лаборатории и врачебного кабинета. У нас работают только врачи высшей категории и опытные лаборанты, которые регулярно повышают свою квалификацию, чтобы не лечить несуществующие болезни, а получать достоверные результаты.
читать далее
свернуть
АНАЛИЗЫ, КОТОРЫЕ МОЖНО СДАТЬ У НАС:
-
Covid-19. Анализы на антитела к коронавирусу
-
Анализы на инфекции
-
Анализы Подготовка и расшифровка
-
Анализ кала
-
Анализ крови на RW
-
Анализ крови на сахар
-
Анализ крови на хламидиоз
-
Анализ мочи
-
Анализ мочи по Нечипоренко
-
Анализ мочи при беременности
-
Анализ на АФП
-
Анализ на ВИЧ
-
Анализ на гемоглобин
-
Анализ на гормон ЛГ
-
Анализ на гормоны
-
Анализ на дисбактериоз
-
Анализ на кортизол
-
Анализ на краснуху
-
Анализ на онкомаркеры
-
Анализ на остеопороз
-
Анализ на паразитов
-
Анализ на паракоклюш
-
Анализ на прогестерон
-
Анализ на пролактин
-
Анализ на РАРР-А
-
Анализ на РЭА
-
Анализ на Са-125
-
Анализ на Са-19-9
-
Анализ на совместимость
-
Анализ на тестостерон
-
Анализ на ТТГ
-
Анализ на ФСГ
-
Анализ на эстриол
-
Анализ соскоба на наличие яиц остриц
-
Анализ спермы (Спермограмма)
-
Анализы на грибок
-
Биохимический анализ крови
-
Гемостазиограмма, Коагулограмма
-
ДНК-диагностика
-
Достоинства и недостатки ПЦР-диагностики
-
Метод ПЦР в гинекологии
- Ошибки в ПЦР-диагностике
-
ПЦР и ИФА-диагностика
-
Современная ДНК-диагностика
-
Строение ДНК
-
Этапы полимеразной цепной реакции (ПЦР)
-
-
Общий анализ крови (Клинический анализ крови)
-
Общий мазок
-
Определение беременности. Анализ крови на беременность
-
-
Анализы при бесплодии
-
Анализы при дисфункции яичников
-
Анализы при кистах и опухолях яичников
-
Анализы при нарушениях веса
-
Анализы при подборе гормональной контрацепции
-
Анализы при подготовке к беременности
-
Молекулярно-генетические исследования
-
Обследование молочных желез
-
Обследование при гирсутизме и проблемах с волосами
-
Обследование при задержке менструации
-
Обследование при зуде гениталий
-
Обследование при менопаузе
-
Обследование при невынашивании беременности
-
Обследование при эндометриозе
-
Обследование щитовидной железы
-
Обследования при определении овуляции
-
Полное обследование организма
-
Эрозия шейки матки
Остались вопросы? Мы перезвоним Вам в течении 10 минут
Наши цены
-
Аллергологические исследования (панели аллергенов)
Наименование услуги Цена, ₽ Панель аллергенов Пищевые №22 (Горбуша, кита, лещ, лосось, речной окунь, сом, скумбрия, навага) 1 490 Панель аллергенов Пищевые №23 (Дорадо, икра красная, лангуст, осьминог, раки, речная форель, рыба сиг, устрицы) 1 490 Панель аллергенов Пищевые № 2 (Арахис, Фундук, Морковь, Треска, Картофель, Кунжут, Миндаль, Краб, Грецкий орех, Сельдерей
3 100 Панель аллергенов № 2 респираторная (RIDA-screen) , IgE (до 5р.д.) 5 490 Респираторная скрининговая панель из смесей аллергенов 7 650 Респираторная панель (Respiratory panel PROTIA Allerqy-Q). Мультиплексный диагностический набор для диагностики аллергии 8 740 Аллерген к эпителиям кошки, IgE (Cat Dander-Epithelium, E1, IgE)
760 Аллерген к перхоти кошки (e1), IgE, ImmunoCAP (Cat dander (e1), IgE) 890 Аллерген к эпителиям собаки (Е2), аллерген-специфические IgG
760 Аллерген к перхоти собаки (е5), IgE, ImmunoCAP (Dog dander (e5), IgE) 890 Аллерген домашняя пыль, Greer (h1), IgE, ImmunoCAP (House dust allergen, Greer (h1), IgE). Используют с целью скрининга на наличие сенсибилизации к распространенным аллергенам домашней пыли. 1 050 Аллерген домашняя пыль Hollister–Stier Lab. (h2), IgE, ImmunoCAP (House dust allergen Hollister –Stier Lab. (h2), IgE). Используют для выявления сенсибилизации к аллергенам домашней пыли.
1 050 Панель наиболее распространённых пищевых аллергенов для скринингового обследования с целью выявления значимых аллергенов при подозрении на пищевую аллергию. Результат выдаётся с указанием концентрации и класса IgE по каждому аллергену в отдельности. Взятие крови из вены 390 -
Бактериологические исследования
Наименование услуги Цена, ₽ Посев отделяемого половых органов на микрофлору, определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам
1 560 Посев на микрофлору из ЛОР органов с определением чувствительности к антибиотикам, бактериофагам и антимикотикам 1 490 Посев мокроты на микрофлору с определением чувствительности к антибиотикам 2 200 Посев мочи с определением чувствительности к антибиотику 1 380 Посев секрета простаты с определением чувствительности к антибиотику 1 380 Посев спермы с определением чувствительности к антибиотику 1 380 Посев на Mycoplasma hominis с чувствительностью к антибиотику 1 110 Посев на Ureaplasma urealyticum с чувствительностью к антибиотику 1 110 Посев на дифтерию 860 Посев на дрожжеподобные грибы (Candida) с определением чувствительности к антибиотику 850 Посев на листерии с определением чувствительности к антибиотикам 1 210 Посев на трихомонаду с чувствительностью к антибиотику 1 500 Посев на гонорею с чувствительностью к антибиотику 1 500 Взятие мазка/соскоба 390 -
Биохимические исследования крови
Наименование услуги Цена,₽ Аланиновая трансаминаза (АЛТ) 290 Аспарагиновая трансаминаза (АСТ) 290 Альфа амилаза 290 Амилаза панкреатическая 410 Альбумин 350 Аполипопротеин А1 630 Аполипопротеин В 630 Антистрептолизин –О (АСЛ-О) 550 Ангеотензинпревращающий фермент (АПФ) 2 590 Антитела к инсулину 975 Антитела к бета- клеткам поджелудочной железы 1 330 Антитела к глутаматдекарбоксилазе (АТ к GAD) 1 330 Гамма-ГТ (ГГТ) 290 Глюкозотолерантный тест 1 130 Билирубин общий 290 Билирубин прямой 290 Билирубин непрямой 410 Белковые фракции 690 Витамин В-12 925 Витамин В-12 активный (холотранскобаламин) 2 050 Глюкоза 290 Гликированный гемоглобин 750 Гомоцистеин 1 800 Д (ИФА) 1 590 Индекс атерогенности 350 Железо 300 КФК (креатинфосфокиназа) 410 Кислая фосфатаза 290 ЛДГ (лактатдегидрогеназа) 290 Латентная железосвязывающая способность сыворотки 330 Лактат 730 Липаза 455 Липопротеин (а) 970 ЛПВП 290 ЛПНП 290 ЛПОНП 330 Миоглобин 1 090 Креатинин 290 Креатининкиназа МВ (КФК- МВ) 520 Кальций общий 285 Кальций ионизированный 480 Калий/Натрий/Хлор 420 Калий 290 Магний 340 Мочевина 290 Мочевая кислота 290 Медь 410 Натрий 290 Общий белок 290 ОЖСС 300 Риск атеросклероза (скрининг)- триглицериды, холестирин общий, ЛПВП, ЛПНП, коэффициент атерогенности 880 Ревматоидный фактор 550 Трансферрин 650 Тропонин I 1 190 Триглицериды 290 Ферритин 685 Фруктозамин 800 Фосфор 300 Фолиевая кислота 999 Хлор 290 Холестерин общий 290 Холинэстераза 350 Цинк 300 Церулоплазмин 640 Щелочная фосфатаза 290 С- реактивный белок 550 С- реактивный белок ультрачувствительный 610 Эозинофильный катионный белок (ЕСП) 910 Эритропоэтин 1 350 в- Cross laps 1235 -
Биохимический анализ мочи
Наименование услуги Цена, ₽ Альбумин (микроальбуминурия) 450 Альфа амилаза 330 Аминокислоты (32) в моче 6 590 Глюкоза (суточная моча) 330 Дезоксипиридинолин (ДПИД) 1 570 Кальций 230 Калий/Натрий/Хлор 350 Креатинин 270 Катехоламины: адреналин, норадреналин, дофамин (суточная моча) 1 850 Магний 330 Микроальбумин (разовая моча) 500 Микроальбумин 760 Мочевая кислота 330 Мочевина 330 Метанефрины (суточная моча) 3 350 Метаболиты катехоламинов и серотонина (ГВК, ВМК, 5-ОИУК ) 1 800 17-КС 1 800 Кортизол (суточная моча) 1 120 Норметанефрины (суточная моча) 1 700 Общий белок 320 Органические кислоты в моче 5 700 Промежуточные метаболиты катехоламинов (метанефрин и норметанефрин ) 2 100 Свободный кортизол 850 Фосфор 330 -
Генетика
Наименование услуги Стоимость, ₽ Генетический риск атеросклероза и ИБС, предрасположенность к дислипидемии 7 500 Развернутое генетическое обследование для женщин 12 900 Фармакогенетика Варфарин 3 200 Синдром Жильбера 3 300 Синдром Жильбера расширенный 3 700 Генетика метаболизма Лактозы 1 550 Prenetix- не инвазивная пренатальная диагностика 28 000 Риск развития сахарного диабета 1 типа 12 700 Риск развития сахарного диабета 2 типа (определение вариантов в генах TCF7L2,PPARG, ADIPOQ.) 7 900 Кардиогенетика Гипертония 4 850 Кардиогенетика Тромбофилия 3 630 Генетика метаболизма Фолатов 3 200 Рак молочной железы 4 300 Рак молочной железы и яичников-расширенный комплекс 22 000 Исследование полеморфизов в гене ТР53 (рак молочной железы) 4 500 Мужское бесплодие: Определение генетических причин азооспермии 2 500 Женское бесплодие 20 700 Беременность(комплекс)- риск невынашивания 3 700 Риск преэклампсии 5 800 HLA генотипирование 2 класса для пары ( цена за 1 человека) 4 700 Аналитическое заключение врача- генетика по одному профилю 2 500 Компленк «Акне» 28 050 Кариотип (1 пациент) 5 000 Кариотипирование с выявлением аберраций 5 400 Кариотип супружеской пары 9 200 Кариотипирование с выявлением аберраций с фото хромосом 6 500 Кариотип с фото хромосом (1 пациент) 6 500 Кариотип супружеской пары с фото хромосом 9 000 Кариотип с выявлением аббераций хромосом (супружеской пары)- с фотографией 11 000 -
Гормональные исследования
Наименование услуги Цена, ₽ Анренокортикотропный гормон (АКТГ) 930 Альфа-фетопротеин (АФП, alfa-Fetoprotein). Для выявления некоторых видов патологии плода при беременности. Диагностика гепатоцеллюлярного рака печени, герминогенных опухолей яичек или яичников
960 Альдостерон 1 050 Андростендион 1 420 Антимюллеров гормон 1 580 Антитела антиовариальные 1 520 Антитела к циклическому цитруллиновому (CCР) 1 430 Антимитохондриальные антитела (АМА) 1 430 Гастрин-17 1 870 Глобулин, связывающий половые гормоны ГСПГ 980 Дегидроэпиандростендион-сульфат (ДГЭА-S) 590 Дигидротестостерон 1 390 Инсулин 650 Ингибин- В 2 370 Кортизол 595 Кальцитонин 990 Лютеинизирующий гормон (ЛГ) 595 Лептин 1 150 Макропролактин (вкл. определение пролактина) 1 230 Маркер формирования костного матрикса (Р1NP ) 1 380 Остеокальцин 1 210 Оценка риска рака яичников индекс ROMA (Risk of Ovarian Malignancy Algorithm, алгоритм расчета риска эпителиального рака яичников), Онкомаркеры: CA-125 и HE 4, для определения у женщин риска развития рака яичника 2 560 Тестостерон 595 Т4 общий 595 Т4 свободный 595 Т3 общий 595 Т3 свободный 595 Тиреотропный гормон (ТТГ) 595 ТГ (тиреоглобулин) 870 Тиреоглобулин (ТГ) 950 17- ОН прогестерон 760 Паратгормон 930 Пролактин 595 Прогестерон 595 Проинсулин 1 280 Простатический специфический антиген (ПСА) общий 690 ПСА общий/свободный (Простатический специфический антиген общий, Prostate-specific antigen total, PSA total). Диагностика предстательной железы
1 390 Оценка здоровья простаты (многофакторная оценка риска рака предстательной железы). Расчет индекса здоровья простаты, включает три маркера: ПСА общего, ПСА свободного и [-2]-про-ПСА. Повышает специфичность лабораторного скрининга рака простаты
3 600 Ренин + ангиотензин I 1 090 Ренин 1 390 CA 153 (Антиген раковый 15-3, Cancer Antigen 15-3). Опухолевый маркёр для мониторинге течения и оценке эффективности терапии карциномы молочной железы
1 030 CA-125 (Антиген раковый 125, Cancer Antigen 125). Опухолевый маркёр рака яичников
1 010 CA 19-9 (Углеводный антиген CA 19-9, Carbohydrate Antigen 19-9, Cancer Antigen 19-9). Маркёр карциномы поджелудочной железы
1 020 CA-242 (Углеводный антиген СА-242, опухолевый маркёр CA-242, Cancer Antigen 242, CA 242). Маркер рака поджелудочной железы и колоректального рака
2 100 Cyfra-21-1 (Фрагмент Цитокератина 19). Мониторинг при раке мочевого пузыря
1 530 HE4 (Белок 4 эпидидимиса человека, Human Epididymis Protein 4). Опухолевый маркёр для комплексной диагностики эпителиального рака яичников
1 480 С- пептид 650 Соматотропный гормон (СТГ) 1 590 Свободный тестостерон 1 290 Соматомедин С 1 350 Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) 595 Эстриол свободный 980 Эстрадиол 595 -
Диагностика аутоимунных заболеваний
Наименование услуги Цена ,₽ Антитела к кардиолипину (IgG, IgM, IgA) (сумм.) кол. 1 450 Антитела к тиреопероксидазе (АТ- ТПО) 610 Антитела к рецепторам (АТ- ТТГ) 1 790 Антитела к антигенам миокарда 2 790 Антинуклеарные антитела/ ANA-скрининг (антигены ds-DNA, гистоны, рибосомальный Р-протеин
nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1, центромеры
1 110 Антитела к односпиральной (денатурированной) ДНК (a-ssDNA) 990 Антитела к двухспиральной (нативной) ДНК (a-dsDNA) 990 Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду (ССР) 1 590 Антитела к В- 2 гликопротеину IgA/М/G (сумм.) кол. 1 100 Антитела к цитоплазме нейтрофилов, NSCA класса IgG 960 Антитела к цитоплазме нейтрофилов, NSCA класса IgА
1 050 ANCA- профиль (протеиназа 3, МПО, эластаза, катепсин G, BP, лактоферин) IgG полуколич. 2 790 Антитела к ХГЧ IgM 2 200 Антитела к ХГЧ IgG 2 200 Антитела к фосфатидилсерину IgG кол. 1 250 Антитела к фосфатидилсерину IgМ кол. 1 250 Антитела к фосфолипидам IgG кол. 1 250 Антитела к фосфолипидам IgМ кол. 1 250 Антиспермальные антитела 1 320 Антиовариальные антитела 1 290 Антитела IgA к тканевой трансглутаминазе 650 Антитела IgG к тканевой трансглутаминазе 650 Антитела IgA к глиадину 965 Антитела IgG к глиадину 965 Антитела к Saccharomyces cerevisiae (ASCA), IgA 1 630 -
Диагностика бактериальных инфекций (сыворотка)
Наименование услуги Стоимость Антитела класса IgA к хламидии трахоматис 755 ₽ Антитела класса IgG к хламидии трахоматис 755 ₽ Антитела класса IgM к хламидии трахоматис 755 ₽ Антитела класса IgA к хламидии пневмонии 1 050 ₽ Антитела класса IgG к хламидии пневмонии 1 050 ₽ Антитела класса IgM к хламидии пневмонии 600 ₽ Антитела класса IgG к микоплазме пневмония 600 ₽ Антитела класса IgМ к микоплазме пневмония 600 ₽ Антитела класса IgА к микоплазме пневмония 960 ₽ Антитела класса IgG к микоплазме хоминис 555 ₽ Антитела класса IgА к микоплазме хоминис 555 ₽ Антитела класса IgМ к микоплазме хоминис 960 ₽ Антитела класса IgG к уреаплазме уреалетикум 555 ₽ Антитела класса IgА к уреаплазме уреалетикум 555 ₽ Антитела класса IgG к хеликобактер пилори 910 ₽ Антитела класса IgA к хеликобактер пилори 910 ₽ Иерсиниоз (РПГ ) полуколичественный 520 ₽ Антитела класса IgG к иерсинеозу 830 ₽ Антитела класса IgА к иерсинеозу 830 ₽ Антитела класса IgG к возбудителю бруцеллеза 960 ₽ Антитела класса IgМ к возбудителю бруцеллеза 960 ₽ Антитела класса IgG к возбудителю боррелиоза 960 ₽ Антитела класса IgМ к возбудителю боррелиоза 960 ₽ Антитела класса IgМ к возбудителю коклюша 970 ₽ Антитела класса IgGк возбудителю коклюша 970 ₽ Антитела класса IgM к возбудителю ветряной оспы 880 ₽ Антитела класса IgG к возбудителю ветряной оспы 880 ₽ РПГА с сальмонеллёзным диагностикумом (О-антиген )(anti-Salmonella A,B,C1,C2,D,E )
770 ₽ Антитела суммарные к туберкуллезу 960 ₽ -
Диагностика вирусных инфекций (сыворотка)
Наименование услуги Цена, ₽ Антитела к вирусу иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ) 600 ВИЧ –ДНК (ПЦР), качественное определение 3 630 ВИЧ –определение РНК вируса , количественный 12 150 Гепатит С (Hepatitis C Virus ), кач. определение РНК 755 Антитела к вирусу гепатита Е (Ig G) 845 Антитела к вирусу гепатита Е (Ig М) 845 Вирус простого герпеса 1 и 2 типа (HSV) кач.определение ДНК 465 Антитела класса IgG к вируса простого герпеса 1 и 2 типа (кол.) 790 Антитела класса IgМ к вируса простого герпеса 1и 2 типа 790 Антитела класса IgМ к вируса простого герпеса 1 типа (кол.) 490 Антитела класса IgG к вируса простого герпеса 6 типа 840 Антитела класса IgG к вируса простого герпеса 8 типа 1160 Антитела класса IgG к вируса простого герпеса 1 (кол.) 710 Антитела класса IgG к вирусу простого герпеса 2 (кол.) 620 Авидность АТ IgG к герпесу 1, 2 типа 1 330 Антитела к вирусу герпеса 6 типа IgM 1 170 Антитела класса IgM к цитомегаловирусу 755 Антитела класса IgG к цитомегаловирусу 755 Авидность антител класса IgG к цитомегаловирусу 1 155 ВЭБ IgG (к ядерному антигену) 1 050 ВЭБ количественный, определение ДНК 550 ВЭБ IgG (к капсидному белку) 840 ВЭБ IgМ (к капсидному белку) 840 ВЭБ IgG (к раннему белку) 970 ВПГ 1 и 2 тип (кол) IgG 960 ВПГ 1 и 2 тип (кол) IgM 790 Антитела IgG к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр ( Anti-EBV-EA IgG) 755 Антитела класса IgG к вирусу краснухи 930 Антитела класса IgM к вирусу краснухи 930 Авидность антител к вирусу краснухи 1 050 Антитела класса IgG к вирусу кори 865 Коклюш (IgM) 970 Коклюш (IgA) 970 Коклюш (Anti-B pertussis IgG) 970 Варицелла-Зостер (Anti- VZV IgG) 880 Варицелла-Зостер (Anti- VZV IgM) 880 Вирусный паротит 765 Антитела класса IgG к аденовирусу 1050 Антитела класса IgA к аденовирусу 1 050 Кандидоз (Anti-Candida albicans IgG) 910 Антитела класса IgG к респираторно-синцитиальному вирусу 950 Антитела к лямблиям сумм кач 685 Антитела к лямблиям IgM кач 840 Антитела к хламидиям пневмонии IgA 760 Антитела к хламидиям пневмонии IgM 760 Антитела к хламидиям пневмонии IgG 760 Антитела к микоплазме пневмонии IgG 600 Антитела к микоплазме пневмонии IgA 840 Антитела к микоплазме пневмонии IgM 600 Антитела к микоплазме хоминис IgA 840 Антитела к микоплазме хоминис IgM 840 Антитела к микоплазме хоминис IgG 840 Паракоклюш 520 Сифилис IgG 810 Сифилис IgM 810 Антитела к токсокар IgG кач 560 Авидность к токсоплазме IgG 910 Антитела к токсоплазме IgG 870 Антитела к токсоплазме IgM 870 Антитела к ЦМВ IgM 840 Антитела к ЦМВ IgG 840 Авидность к ЦМВ IgG 1 150 Антитела IgA к тканевой трансглутаминазе 720 Антитела IgG к тканевой трансглутаминазе 720 -
Забор материала
Наименование услуги Стоимость Забор биологического материала 390 ₽ Забор биологического материала: кровь из вены 390 ₽ Забор биологического материала: кровь из пальца 390 ₽ Забор биологического материала: мазок 390 ₽ Забор биологического материала: секрет простаты 390 ₽ -
Имунный статус
Наименование услуги Цена, ₽ Исследования основных параметров клеточного иммунитета: подсчет лейкоцитов, лимфоцитов, нетрофилов, CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD56, CD4/CD8, CD19
3 800
Расширенное иммунологическое исследование клеточного иммунитета: подсчет лейкоцитов, лимфоцитов, нейрофилов, CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD38, CD54, CD71, CD95, CD56, CD4/CD8, CD19, CD95
5 900
Иммуноглобулины A, M, G 850 Иммуноглобулины A (IgA) 380 Иммуноглобулины М (IgM) 380 Иммуноглобулины G (IgG) 380 Иммуноглобулины E (IgE) 780 С3 компонент комплемента 870 С4 компонент комплемента 870 Общие циркулирующие имунные комплексы (ЦИК) 1 010 НСТ- тест, латекс- тест (фагоцитоз) 610 -
Интерфероновый статус
Наименование услуги Стоимость Интерфероновый статус без определения чувствительности лейкоцитов к препаратам 3 400 ₽ Роферон 630 ₽ Амиксин 630 ₽ Неовир 630 ₽ Циклоферон 630 ₽ Галавит 630 ₽ Гепон 630 ₽ Иммуномакс 630 ₽ Ликопид 630 ₽ Полиоксидоний 630 ₽ Ридостин 630 ₽ Кагоцел 630 ₽ Имунофан 630 ₽ Арбидол 630 ₽ Глутоксим 630 ₽ Тактивин 630 ₽ Тимоген 630 ₽ Иммунал 630 ₽ Имунорикс 630 ₽ -
Инфекции, вызываемые простейшими, паразиты и грибы
Наименование услуги Цена, ₽ Антитела класса IgM к токсоплазме гонди 755 Антитела класса IgG к токсоплазме гонди 755 Авидность антител IgG к токсоплазме гонди 910 Антитела к возбудителю к псевдотуберкуллёза (РПГА) 515 Аскариды IgG 975 Антитела класса IgG к антигенам аскарид 975 Антитела класса IgG к амебам 950 Амебы IgG 755 Антитела класса IgG к возбудителю аспергиллеза 920 Антитела класса IgG к возбудителю кандидоза 725 Кандидоз (Anti-Candida albicans IgG) 910 Лейшманиоз 2 090 Лептоспироз 1 390 Лямблия сумм. кач 685 Лямблия IgМ кач 840 Лямблия (сумм.) 685 Лямблия IgМ 685 Описторхоз IgG кач. 410 Описторхоз IgG 410 Печёночный сосальщик 1 390 Сальмонеллы (антигены О,.Н) полукол 450 Свиной цепень 1 490 Токсокары IgG кач. 410 Токсокара IgG 410 Трихинеллы IgG кач. 410 Трихинелла IgG 410 Эхинококки IgG кач. 410 Эхинококк IgG 410 Исследования микробиома человека тонкой кишки методом ГХ — МС (по Осипову) 4 700 -
Исследование кала
Наименование услуги Стоимость Анализ кала общий (копрограмма) 620 ₽ Анализ кала на определение панкреатической эластазы 2 350 ₽ Анализ кала на дисбактериоз 1 910 ₽ Исследования микробиома человека толстой кишки (просветная кишка) методом ГХ – МС (по Осипову) 4 700 ₽ Анализ кала на простейшие и яйца гельминтов 440 ₽ Анализ кала на простейшие и яйца гельминтов ПАРАСЕП 920 ₽ Кальпротектин в кале 2 900 ₽ Анализ на энтеробиоз 430 ₽ Анализ кала на скрытую кровь 440 ₽ Токсины А и В Clostridium difficile 1100 ₽ Ar Helic.pylori в кале 850₽ Исследования микробиома человека толстой кишки (просветная микробиота) ГХ — МС (по Осипову ) 4 700 ₽ -
Исследования крови
Наименование услуги Цена, ₽ АЧТВ 300 Антитромбин III 520 Анализ крови на свертываемость 430 Анализ крови на свертываемость+ длит.кровотечения 790 Анализ на определение группы крови (резус фактор) 750 Антитела к резус фактору 1 110 Антигены системы Kell 870 Волчаночный антикоагулянт 1 100 Инсулино- резистентность 1 020 Клинический анализ крови 3 (гемоглобин, лейкоциты, СОЭ) 730 Клинический анализ крови (развёрнутый) 730 Клинический анализ крови (развёрнутый+ тромбоциты) 730 Коагулограмма (гемостазиограмма) 1 350 Определение уровня сахара в крови 280 Определение уровня сахара в крови (с нагрузкой) 1 130 Протромбиновый индекс,протромбин по Квику + МНО 405 Протромбиновое время 405 Протеин S 1 560 Протеин C 2 200 Фибриноген 405 РКФМ 320 D- димер 1 485 -
Общеклиническое исследование отделяемого
Наименование услуги Цена, ₽ Анализ мочи (общий) — срок изготовления 1 день 410 Анализ мочи (общий) — срочно, в день обращения 450 Анлиз мочи (2-х стаканная проба) 630 Анализ мочи по Нечипоренко — срок изготовления 1 день 480 Анализ мочи по Нечипоренко — срочно в день обращения 530 Анализ мочи — тест на беременность по моче 240 Посткоитальный тест 640 Мазок на флору 600 Мазок из носа на эозинофилы 400 Общеклиническое исследование назального секрета (риноцитограмма) 850 Соскоб шейки матки и/или цервикального канала по Лейшману-1препарат 670 Исследование пунктатов молочной железы и кожи 670 Исследование отделяемого молочной железы 670 Исследование пунктатов щитовидной железы 670 Анализ спермограммы с исследованием антиспермальных антител IgA IgG ( MAR — тест) 3 920 Жидкостная цитология 2 200 Определение онкомаркера в жидкостной цитологии 5 100 Биопсия исследование 1 фрагмента (гисталогия) 3 870 Соскоб с кожи на грибы 750 Соскоб с ногтевых пластинок на грибы 750 Соскоб на демодекс 750 Соскоб с кожи на чесоточного клеща 750 Соскоб на трепонему 750 Анализ спермограммы 1 990 Общеклиническое исследование сока предстательной железы 600 -
ПЦР диагностика (соскоб)
Наименование услуги Стоимость ПЦР 10 2 950 ₽ ДНК Listeria monocytogenes (ПЦР) 850 ₽ ДНК Listeria monocytogenes (кровь) 450 ₽ Вирус простого герпеса 6 типа (HHV), количественно ДНК 400 ₽ Epstein-Barr virus (EBV), количественно, ДНК 350 ₽ Cytomegalovirus (CMV), количественно, ДНК 300 ₽ Флороценоз 1 690 ₽ Флороценоз и Микроскопия 1 880 ₽ Флороценоз и NCMT 1 980 ₽ Флороценоз и NCMT и Микроскопия 2 610 ₽ -
ПЦР и NASBA диагностика (соскоб)
Наименование услуги Цена, ₽ ПЦР Бакретиальный вагиноз колич. 650 ПЦР Хламидия кач. ДНК 420 ПЦР Хламидия кол. 650 ПЦР Флороценоз микоплазмы 740 ПЦР Микоплазма genitalium- кол. ДНК 650 ПЦР Микоплазма hominis – кол.ДНК 650 ПЦР Микоплазма hominis- кач. ДНК 420 ПЦР Микоплазма genitalium- кач. ДНК 420 ПЦР Вирус Варицелла-Зостер 420 Соскоб с гортани на Mycoplasma / Chlamidia (pneumoniac) 610 ПЦР Уреаплазма кач. ДНК 420 ПЦР Уреаплазма колич. 650 ПЦР U.urealyticum / U.parvum (биовары) 420 ПЦР Герпес 1/2 (HSV)- кач. ДНК 420 ПЦР Цитомегаловирус кач. 420 ПЦР Вирус Эпштейна-Барр 420 ПЦР Трихомонада 420 ПЦР Гонорея кач. 420 ПЦР Гарднерелла кач. ДНК 420 ПЦР Гарднерелла колич. ДНК 610 Деференциация возбудителя коклюша 610 ПЦР Кандидоз кач. ДНК 420 ПЦР ВПЧ 6/ 11- кач. ДНК 420 ПЦР ВПЧ 6 –кач. ДНК 420 ПЦР ВПЧ ВКР 16- кач ДНК 420 ПЦР ВПЧ ВКР 18- кач ДНК 420 ПЦР ВПЧ 16/ 18- кач ДНК 420 ПЦР ВПЧ ВКР сум- кач ДНК 520 ПЦР ВПЧ ВКР определение типа- кач ДНК 790 ПЦР ВПЧ ВКР без определения типа- колич ДНК 1 190 ЦМВ / ВЭБ /ВПГ 6 типа кач. 850 ВРИ микоплазма / хламидии кач. 550 ПЦР Стрептококк группы В 1 280 ПЦР Стрептококк группы А кач. 900 ANCA –профиль IgG полуколичественный 1 760 NASBA chlamidia trachomatis 2 370 NASBA neisseria gonorrhoeae 2 370 NASBA trichomonas vaginalis 2 370 -
Ранняя диагностика заболеваний ЭЛИ-ТЕСТ
Наименование услуги Стоимость «ЭЛИ-Висцеро-Тест-24» (ранняя диагностика, полная панель) нервной системы, миокарда, печени, почек, надпочечников лёгких, стенок желудка, кишечника, щитовидной железы, поджелудочной железы, простаты, тромбоцитов, эндотелия сосудов, а также к антигенам, характеризующие состояние иммунной системы. 6 950 ₽ «ЭЛИ-В-Тест -6» (общее состояние иммунной системы при подготовке к вакцинации) 2 000 ₽ «ЭЛИ-Диа-Тест-8» (состояние поджелудочной железы, сахарный диабет; общая терапия и эндокринология; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения) 2 100 ₽ «ЭЛИ-ЖКТ- Тест -12» (состояние органов системы пищеварения; гастроэнтерология; общая терапия; гепатология; эндокринология; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения) 2 600 ₽ «ЭЛИ-П-Комплекс-12» (репродуктивное здоровье женщины) 2 840 ₽ «ЭЛИ- Тест-12» (мужское здоровье ) 2 640 ₽ «ЭЛИ-АФС-ХГЧ Тест» (антифосфолипидный синдром, анти-ХГЧ синдром, состояние иммунной системы; акушерство и общая терапия; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения) 1 850 ₽ Цитотест. Индивидуальный цитотоксический тест на переносимость 21 химического реагента (консерванты, красители, загустители, ароматизаторы) 5 000 ₽ «ЭЛИ-АНКОР-Тест -12» (состояние сердечнососудистой системы)- предназначен для клинического использования в общей терапии, кардиологии и флебологии для оценки выраженности патологических процессов,нарушающих нормальное функционирование сердечно-сосудистой системы. 2 600 ₽ «ЭЛИ-Н-Тест-12» (состояние нервной системы) 2 600 ₽ -
Серологические исследования
Наименование услуги Стоимость Вирусная диагностика PНK Zika virus, ПЦР (ЭДТА+ слюна+ моча) 4 200 ₽ Вирусная диагностика PНK Zika virus, ПЦР (эякулят) 1 500 ₽ Гепатит А (HAV): anti- HAV IgG, ИФА, кач. 720 ₽ anti- HAV IgМ, ИФА, кач. 900 ₽ Гепатит B (HBV): ДНК HBV, кровь, кач. ПЦР 360 ₽ HbsAg, ИФА, кач. 600 ₽ анти- HВsAg, кол. 1 300 ₽ anti- HBc ИФА cуммар., кач. 520 ₽ anti- HBc IgM, ИФА, кач. 850 ₽ HBeAg, ИФА, кач. 720 ₽ Гепатит C (HCV): РНК HCV, кровь, генотипирование (1a, 1b, 2a, 2b, 3a) ПЦР 1 300 ₽ anti- HСV IgМ, ИФА, кач. 600 ₽ anti- HСV суммарные, ИФА, кач. 400 ₽ РНК HСV , кач. 755 ₽ РНК HСV , кол. 9 190 ₽ Гепатит D (HDV): anti- HDV IgМ, ИФА, кач. 750 ₽ anti- HDV, ИФА, сумм., кач. 750 ₽ Антимитохондриальные антитела (АМА) 1 450 ₽ Антитела к микросомальной фракции печени и почек (LKM) 1 100 ₽ RW РПГА 520 ₽ Выявление антител к Treponeme pallidum методом РИФ в сыворотке крови 2 910 ₽ Определение антител Treponeme pallidum РИБТ 3 960 ₽ Выявление IgG антител к Treponeme pallidum методом иммуноблокинга (WB) в сыворотке крови 4 100 ₽ Выявление IgM антител к Treponeme pallidum методом иммуноблокинга (WB) в сыворотке крови 4 100 ₽ Выявление антител к Treponeme pallidum в реакции миккропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR/РМТ) в сыворотке крови 900 ₽ Антитела к Treponeme pallidum (IgM), РПГА 810 ₽ Антитела к Treponeme pallidum (IgG), РПГА 810 ₽ Антитела к бета- клеткам поджелудочной железы 1 330 ₽ Антитела к глутаматдекарбоксилазе (АТ к GAD) 1 450 ₽
Индивидуальный подход к лечению каждого пациента
Использование инновационного оборудования и аппаратуры
Лечение эректильной дисфункции (импотенции) ударно-волновым методом
Полный спектр лабораторной и функциональной диагностики
О клинике «евромедпрестиж»
Специально для сохранения и восстановления здоровья людей в 2000 году была основана
многопрофильная клиника «ЕВРОМЕДПРЕСТИЖ», в которой работают лучшие специалисты из 25 областей
медицины. Наши врачи, в совершенстве владеющие своим ремеслом, готовы бороться с любым Вашим недугом!
Мы заботимся о вашем здоровье с вниманием и любовью и поэтому нас рекомендуют друзьям
Тертичная Светлана Петровна, Главный врач клиники «Евромедпрестиж»
Благодарим Вас
за доверие!
Команда «Биокор Текнолоджи» разрабатывает тест-системы и наборы для молекулярной диагностики методом ПЦР, и расскажет в этом материале, на какие детали стоит обратить внимание для предотвращения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
ПЦР является универсальным методом лабораторной диагностики, позволяющим идентифицировать даже не собственно вирус или бактерию в биологическом материале, а участки их РНК или ДНК.
Чувствительность ПЦР-анализа приближается к 10-100 копиям генетического материала возбудителя на реакцию. Для сравнения, если человек находится в активной фазе развития заболевания, то его биологический материал содержит миллионы геномов возбудителя на миллилитр, что, после выделения нуклеиновой кислоты будет равно нескольким тысячам копий на реакцию.
В мире, и в Украине в частности, с начала эпидемии COVID-19 ведутся дискуссии относительно того, насколько надежной является такая методика. Одни источники говорят, что ошибочным может быть каждый четвертый тест, другие указывают, что количество ложноположительных и ложноотрицательных результатов составляет лишь несколько процентов. Учитывая актуальность темы, рассмотрим на примере ПЦР для диагностики COVID-19 по каким причинам могут возникать сомнительные или ошибочные результаты. Большинство указанных аспектов имеет место и в случае с ПЦР-тестированием других инфекционных заболеваний человека.
Особенности выбора места для взятия биологического материала
Такие возбудители, как SARS-CoV-2, способны поражать значительное количество органов. Для исследования на COVID-19 обычно берутся мазки из горла или носоглотки, где возбудитель в большом количестве находится ограниченное время — на 5-10 день от начала инфицирования, далее он спускается ниже — к бронхам и легким. Поэтому отрицательный результат ПЦР-теста не может исключать факта инфицирования пациента COVID-19.
С одной стороны, риски получить ложноотрицательный результат ПЦР-теста несколько возрастают на 1-7 день от начала инфицирования, когда количество вируса мало, а также на 10-30 день, когда, во-первых, COVID-19 уже «ушел» ниже, и, во-вторых, в организме уже присутствуют в достаточном количестве антитела, и размножение вируса более или менее эффективно сдерживается иммунной системой. С другой стороны, в некоторых случаях, мы можем получить сомнительно положительный результат ПЦР-теста даже на 60-й день от начала инфицирования, когда человек уже переболел, но в ее биологическом материале все еще можно найти обломки вируса. Все вышесказанное касается только некоторых отдельных случаев и не имеет характера «абсолютной закономерности».
Алгоритм тестирования регламентирован на государственном уровне и, если существует обоснованное подозрение на инфицирование COVID-19, для уточнения диагноза могут проводить ПЦР-анализ повторно.
Неправильное взятие биологического материала
Во избежание ложноположительных результатов вследствие загрязнения — попадание молекул ДНК/РНК из внешней среды, — клинический материал необходимо отбирать стерильными одноразовыми инструментами в одноразовые стерильные пробирки согласно установленным стандартам МОЗ. Взятие материала должны проводить медицинские работники, одетые в средства индивидуальной защиты.
Недостаточное количество биологического материала может привести к ложноотрицательным результатам исследования. В некоторых случаях, эту проблему можно отследить на этапе выделения нуклеиновых кислот или в процессе амплификации (при условии использованием в диагностических наборах для обнаружения SARS-CoV-2 внутреннего контроля, то есть фрагмента генома человека).
Несоблюдение температуры и сроков хранения
Учитывая возможность распада РНК в клиническом материале, сроки хранения и транспортировки должны быть минимальными. В идеальном случае все мазки нужно транспортировать в лабораторию в течение 24-48 часов с момента взятия в специальном транспортной среде при температуре плюс 4 °C. Транспортная среда должна содержать специальные реагенты — муколитики, обеспечивающие разрушение слизи, которая подавляет ПЦР. Если отсутствует возможность своевременно доставить образцы материалов в лабораторию, их можно замораживать до минус 70 °C, используя для этого твердую углекислоту — «сухой лед». Образцы можно хранить в лаборатории в течение недели при температуре минус 20 °C, или до месяца при температуре минус 70 °C. Критическим моментом является количество замораживаний/размораживаний образца: чем их больше, тем ниже качество образца и, вследствие этого, и чувствительность метода в целом.
В результате нахождения образцов в транспортной среде больше срока, рекомендованного производителем, происходит рост естественной бактериальной микрофлоры, которая обычно находится в ротовой полости человека, и разрушение молекул вирусной РНК в образце. При использовании специальных консервантов и стабилизаторов, биоматериал может храниться в температурном диапазоне в соответствии с инструкцией производителя сроком до месяца.
Выделение нуклеиновых кислот
ПЦР-исследование не проводится непосредственно на биологических образцах и требует предварительной пробоподготовки. На этом этапе большое значение имеет качество наборов для экстракции нуклеиновых кислот, которые должны обеспечить выделение образца соответствующей концентрации и степени очистки от примесей, подавляющие ПЦР. Из-за неправильного выбора набора также может быть потеряна часть или даже все РНК возбудителя, что может приводить к ложноотрицательным результатам. Качество и чистоту нуклеиновых кислот можно проверить с помощью специального аналитического прибора — спектрофотометра. Он есть во многих лабораториях, осуществляющих ПЦР-исследования.
Выделенную из образцов РНК можно хранить при температуре минус 20 °C до недели. Для более длительного хранения нужна температура минус 70 °C. Также можно использовать специальные реагенты, стабилизирующие РНК и предупреждают ее деградации (например, DEPC — диэтилпирокарбонат).
Амплификация
Процесс амплификации (увеличение копий участков ДНК, которые обычно содержат необходимые фрагменты целевых генов) может включать до 45 циклов, во время каждого из них количество копий удваивается. Он обеспечивается реагентами, которые входят в диагностические наборы для выявления SARS-CoV-2, и приборами, обеспечивающими циклическую смену температур — амплификаторами.
Для обеспечения корректных результатов, качество диагностических наборов является первоочередным требованием. Также лаборатории должны проводить процедуру их верификации, проведя сравнительные испытания с собственными панелями референтных образцов и решениями от других производителей. Наборы должны поступать в лаборатории в термобоксах с холодовыми блоками и храниться при температуре минус 20 °C. Несоблюдение условий их транспортировки или хранения приводит к повреждению компонентов наборов, и, вследствие того, к ложноотрицательным результатам. Чтобы предупредить эту ошибку, в состав каждого диагностического набора входит положительный контрольный образец, задачей которого является установление работоспособности реагентов.
Диагностические наборы должны быть совместимыми с амплификаторами, используемыми в лаборатории. Реагенты, входящие в состав набора, меченные различными флуоресцентными красителями. Детекция флуоресцентного сигнала от каждого красителя происходит в определенном диапазоне (на определенном «канале»). Если прибор имеет слабую чувствительность по определенным флуоресцентным каналам, это может приводить к ошибочным результатам. Во избежание ошибок работники лабораторий должны проверять исправность работы приборов, а также настройки параметров работы и протоколов амплификации.
Контаминация образцов
При несоблюдении мер безопасности в помещениях лаборатории могут накапливаться продукты амплификации. Это приводит к контаминации образцов, и, в общем итоге, к ложноположительным результатам. Для подтверждения отсутствия загрязнения, каждую серию ПЦР-исследований нужно сопровождать постановкой негативных контрольных образцов, включенных в состав диагностических наборов для выявления SARS-CoV-2.
Перекрестная контаминация может возникать из-за попадания аэрозольных частиц от соседнего образца, содержащего вирусную РНК, при внесении образцов в ПЦР-смесь. На этапе амплификации контаминированный образец издает слабый положительный результат, который означает, что в исследуемой пробе обнаружено очень малое количество вируса. Но такой результат также может указывать, что человека тестировали до наступления полного выздоровления и уровень вируса в его организме был низким.
Способы предупреждения контаминации — использование наконечников с фильтрами, химическая и ультрафиолетовая дезинфекция всех рабочих поверхностей, наличие отдельных наборов дозаторов, оборудования, халатов и перчаток для каждой зоны, проведения внутрилабораторного и внешнего контроля качества исследований — регламентированы на государственном уровне.
Другими эффективными, однако дорогостоящими мероприятиями для предотвращения контаминации является автоматизация этапов выделения нуклеиновых кислот и амплификации, а также двойной контроль — постановка каждого образца в двух параллельных реакциях.
Ошибки обработки данных
Расчеты результатов ПЦР в реальном времени проводятся с использованием компьютерных программ. Амплификатор в автоматическом режиме измеряет интенсивность флуоресценции в образцах на каждом цикле. Кривая амплификации имеет так называемую фазу экспоненциального роста, после которой следует фаза плато. Автоматическая интерпретация результатов не всегда дает правильный результат, поэтому рекомендуется проводить анализ кривых амплификации на предмет пересечения пороговых значений, и корректировать задачи пороговых значений по мере необходимости. Для большей достоверности можно сравнить такую сомнительную кривую с кривой подтвержденного положительного образца.
Подытожим
На каждом этапе исследования являются условия, несоблюдение которых может привести к недостоверным результатам. Некоторые из потенциальных ошибок являются общими для большинства видов лабораторной диагностики (например, ошибки при взятии и хранения образца, настройка оборудования), тогда как другие являются специфическими только для этого вида исследования (например, контаминация образцов, низкое качество выделенных нуклеиновых кислот).
ПЦР — многостадийный метод, и для получения максимально достоверных и воспроизводимых результатов необходимо надлежащее выполнение каждого этапа процесса в соответствии со стандартами МОЗ и инструкциями производителей. Вторым важным условием является качество всех реагентов и расходных материалов, используемых в ПЦР: систем для сбора биологических материалов, наборов для выделения нуклеиновых кислот, диагностических наборов для выявления SARS-CoV-2.